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01General information
- Description
AML12 細胞，亦稱為 Alpha Mouse Liver 12 細胞，是一種源自轉基因小鼠肝臟的非致瘤性上皮細胞系。這些細胞最初是為了提供一個適合研究成年小鼠肝細胞功能及肝臟生物學的體外模型而開發的。 AML12 細胞表現出分化肝細胞的典型特徵，包括能產生白蛋白、轉鐵蛋白及其他肝臟特異性蛋白質，使其成為毒理學、藥物代謝及肝臟疾病研究中極具價值的資源。
該細胞系是從攜帶人類轉化生長因子α（TGF-α）轉基因的小鼠肝細胞中建立的，該轉基因受小鼠金屬硫蛋白-I啟動子控制。這種基因改造有助於使細胞永生化，同時不破壞其分化狀態。 在標準細胞培養條件下，AML12 細胞能維持穩定的表型與核型，其中特別需要在生長培養基中添加地塞米松以及胰島素-轉鐵蛋白-硒，以促進增殖並維持肝細胞特異性功能。
- Tissue
- 肝臟
- Applications
- 3D 細胞培養、高通量篩選、毒理學
- Synonyms
- AML-12
- AML 12
- Alpha Mouse Liver 12
02Classification
- Organism
- Mouse
- Sex
- Male
- Growth properties
- Adherent
- GMO status
- GMO-S1
- GMO status details
- GMO-S1: This murine hepatocyte cell line (AML12) contains a human TGF-α transgene introduced by transfection, enabling growth-factor-dependent signaling studies. The insert is stably integrated into hepatocytic cells. This classification applies only within Germany and may differ elsewhere.
- Biosafety level
- 1
03Characteristics
- Morphology
- 上皮性
- Cell type
- 肝細胞
04Identifiers
- Citation
- AML12（Cytion 型號 300643）
- NCBI TaxID
- 10090
- Cellosaurus
- CVCL_0140
05Expression and susceptibility
- Products
- 這些細胞會高量地表達人類 TGF-α，並低量地表達小鼠 TGF-α。
06Handling and culture
- Culture medium
- DMEM：Ham's F12（1:1），重量比：3.1 g/L 葡萄糖，重量比：2.5 mM L-谷氨酰胺，重量比：15 mM HEPES， w: 0.5 mM 丙酮酸鈉，w: 1.2 g/L NaHCO₃（Cytion 產品編號 820400a）
- Incubation atmosphere
37°C，5% CO₂，加濕環境。
- Supplements
- 在培養基中加入 10% 胎牛血清 (FBS)、10 微克/毫升胰島素、5.5 微克/毫升轉鐵蛋白、5 納克/毫升硒、40 納克/毫升地塞米松
- Dissociation reagent
- Accutase
- Subculturing
- 從貼壁細胞中移除舊培養基，並用不含鈣和鎂的PBS洗滌細胞。T25培養瓶使用3-5毫升PBS，T75培養瓶則使用5-10毫升。 接著，用 Accutase 完全覆蓋細胞，T25 培養瓶使用 1–2 毫升，T75 培養瓶則使用 2.5 毫升。將細胞於室溫下孵育 8–10 分鐘，使其脫附。 孵育後，將細胞與 10 毫升培養基輕柔混合以使其重新懸浮，然後以 300xg 離心 3 分鐘。棄去上清液，將細胞重新懸浮於新鮮培養基中，並轉移至已預先加入新鮮培養基的新培養瓶中。
- Thawing and culturing
Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.
Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.
For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.
Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.
Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.
Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.
Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.
Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.
07Quality control and cryopreservation
- Sterility
透過基於 PCR 的檢測及基於發光原理的支原體檢測方法，排除支原體污染的可能性。
為確保無細菌、真菌或酵母菌污染，每日均會對細胞培養物進行目視檢查。
- Freeze medium
- 作為冷凍保存培養基，我們使用完全生長培養基（含 FBS）+ 10% DMSO 以確保解凍後的存活率，或使用 CM-1 （Cytion 型號 800100），該培養基含有經優化的滲透保護劑和代謝穩定劑，可提升細胞恢復率並減輕冷凍誘導的壓力。
- Storage conditions
若需長期保存，請將試管置於溫度約為 −150 至 −196 °C 的氣相液氮中。僅在轉移至液氮之前，可將試管暫時存放於 −80 °C 環境中，作為短期過渡步驟。
- Shipping conditions
冷凍保存的細胞系會以乾冰冷藏，並裝於經驗證的隔熱包裝中，包裝內含有足夠的冷媒，以確保在運輸過程中溫度維持在約 −78 °C。收到貨物後，請立即檢查容器，並盡快將試管轉移至適當的儲存場所。
08Donor
- Breed / subspecies
- CD-1 MT42 轉基因
- Donor age
- 3個月
09Legal and safety
- Safety precautions
- 若計劃將低溫試管存放在液態氮中以供日後解凍，必須嚴格遵守相關安全措施。 必須穿戴適當的防護手套和防護服，且在將冷凍樣本移入或移出液氮罐時，必須佩戴口罩或安全護目鏡。此舉旨在降低因取出時冷凍試管可能發生爆炸而導致受傷的風險，此類爆炸可能造成尖銳碎片飛濺。
- Warranty
在 Cytion，我們對產品的品質與存活率提供保障。 我們保證，自本公司設施出貨後 60 天內，我們的細胞在培養開始時仍具存活能力。 我們保證所有材料均符合 分析證明書及／或產品說明書中所載的規格。
詳情請參閱我們的 《保固聲明》。
- Material Transfer Agreement required
- Yes