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AML12
Gewebe
Leber
Synonyme
AML-12, AML 12, Alpha Mouse Liver 12

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AML12

Cell line · Artikelnummer 300643

AML12 cells, also known as Alpha Mouse Liver 12 cells, are a non-tumorigenic epithelial cell line derived from the liver of a transgenic mouse. These cell...

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01Allgemeine Informationen

Beschreibung

AML12-Zellen, auch bekannt als Alpha Mouse Liver 12-Zellen, sind eine nicht-tumorigene Epithelzelllinie, die aus der Leber einer transgenen Maus stammt. Diese Zellen wurden ursprünglich entwickelt, um ein geeignetes In-vitro-Modell für die Untersuchung der Hepatozytenfunktion und der Leberbiologie der erwachsenen Maus zu schaffen. AML12-Zellen weisen typische Merkmale von differenzierten Hepatozyten auf, darunter die Produktion von Albumin, Transferrin und anderen leberspezifischen Proteinen, was sie zu einer unschätzbaren Ressource für die Forschung in den Bereichen Toxikologie, Arzneimittelstoffwechsel und Lebererkrankungen macht.

Die Zelllinie wurde aus Hepatozyten hergestellt, die aus einer Maus isoliert wurden, die ein Transgen für den menschlichen transformierenden Wachstumsfaktor alpha (TGF-alpha) unter der Kontrolle des Metallothionein-I-Promotors der Maus trägt. Diese genetische Veränderung trägt zur Immortalisierung der Zellen bei, ohne ihren differenzierten Zustand zu beeinträchtigen. AML12-Zellen behalten unter Standard-Zellkulturbedingungen einen stabilen Phänotyp und Karyotyp bei. Dazu gehört ein einzigartiger Bedarf an Dexamethason und Insulin-Transferrin-Selenium im Wachstumsmedium, um die Proliferation zu fördern und hepatozytenspezifische Funktionen aufrechtzuerhalten.

Gewebe
Leber
Anwendungen
3D-Zellkultur, Hochdurchsatz-Screening, Toxikologie
Synonyme
  • AML-12
  • AML 12
  • Alpha Mouse Liver 12

02Klassifizierung

Organismus
Maus
Sex
Männlich
Wachstumseigenschaften
Anhänger
GVO-Status
GMO-S1
Angaben zum GVO-Status
GMO-S1: This murine hepatocyte cell line (AML12) contains a human TGF-α transgene introduced by transfection, enabling growth-factor-dependent signaling studies. The insert is stably integrated into hepatocytic cells. This classification applies only within Germany and may differ elsewhere.
Biologische Sicherheitsstufe
1

03Merkmale

Morphologie
Epithelial
Zelltyp
Hepatozyten

04Bezeichner

Quellenangabe
AML12 (Cytion Katalognummer 300643)
NCBI-Steuer-ID
10090
Cellosaurus
CVCL_0140

05Expression und Anfälligkeit

Produkte
Die Zellen exprimieren hohe Konzentrationen von menschlichem TGF alpha und geringere Konzentrationen von Maus-TGF alpha.

06Handhabung und Kultur

Nährmedium
DMEM:Ham's F12 (1:1), w: 3,1 g/L Glucose, w: 2,5 mM L-Glutamin, w: 15 mM HEPES, w: 0,5 mM Natriumpyruvat, w: 1,2 g/L NaHCO3 (Cytion-Artikelnummer 820400a)
Inkubationsatmosphäre

37°C, 5%CO2, befeuchtete Atmosphäre.

Nahrungsergänzungsmittel
Ergänzen Sie das Medium mit 10% FBS, 10 Mikrogramm/ml Insulin, 5,5 Mikrogramm/ml Transferrin, 5 ng/ml Selen, 40 ng/ml Dexamethason
Dissoziationsreagenz
Accutase
Subkultivierung
Entfernen Sie das alte Medium von den adhärenten Zellen und waschen Sie sie mit PBS, das kein Kalzium und Magnesium enthält. Für T25-Kolben 3-5 ml PBS und für T75-Kolben 5-10 ml verwenden. Anschließend werden die Zellen vollständig mit Accutase bedeckt, wobei 1-2 ml für T25-Kolben und 2,5 ml für T75-Kolben verwendet werden. Lassen Sie die Zellen 8-10 Minuten bei Raumtemperatur inkubieren, um sie abzulösen. Nach der Inkubation mischen Sie die Zellen vorsichtig mit 10 ml Medium, um sie zu resuspendieren, und zentrifugieren sie dann 3 Minuten lang bei 300xg. Den Überstand verwerfen, die Zellen in frischem Medium resuspendieren und in neue Kolben überführen, die bereits frisches Medium enthalten.
Auftauen und Kultivierung
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Qualitätskontrolle und Kryokonservierung

Sterilität

Eine Kontamination mit Mykoplasmen wird sowohl durch PCR-basierte Assays als auch durch lumineszenzbasierte Mykoplasmen-Nachweisverfahren ausgeschlossen.

Um sicherzustellen, dass keine Kontamination mit Bakterien, Pilzen oder Hefen vorliegt, werden die Zellkulturen täglich visuell überprüft.

Gefriermedium
Als Kryokonservierungsmedium verwenden wir komplettes Wachstumsmedium (einschließlich FBS) + 10 % DMSO für eine angemessene Lebensfähigkeit nach dem Auftauen oder CM-1 (Cytion Katalognummer 800100), das optimierte Osmoprotektoren und Stoffwechselstabilisatoren enthält, um die Erholung zu verbessern und kryoinduzierten Stress zu reduzieren.
Lagerbedingungen

Zur Langzeitkonservierung werden die Fläschchen in flüssigem Stickstoff bei etwa -150 bis -196 °C gelagert. Eine Lagerung bei -80 °C ist nur als kurzer Zwischenschritt vor der Überführung in flüssigen Stickstoff akzeptabel.

Versandbedingungen

Kryokonservierte Zelllinien werden auf Trockeneis in einer validierten, isolierten Verpackung mit ausreichend Kühlmittel versandt, um während des gesamten Transports eine Temperatur von etwa -78 °C aufrechtzuerhalten. Prüfen Sie den Behälter bei Erhalt sofort und bringen Sie die Fläschchen unverzüglich in ein geeignetes Lager.

08Spender

Rasse / Unterart
CD-1 MT42 transgene
Alter des Spenders
3 Monate