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AML12
Tecido
Fígado
Sinónimos
AML-12, AML 12, Alpha Mouse Liver 12

Documentos

AML12

Cell line · Número do produto 300643

AML12 cells, also known as Alpha Mouse Liver 12 cells, are a non-tumorigenic epithelial cell line derived from the liver of a transgenic mouse. These cell...

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01Informações gerais

Descrição

As células AML12, também conhecidas como células Alpha Mouse Liver 12, são uma linha de células epiteliais não tumorigénicas derivadas do fígado de um rato transgénico. Estas células foram inicialmente desenvolvidas para fornecer um modelo in vitro adequado para estudar a função dos hepatócitos e a biologia do fígado do ratinho adulto. As células AML12 expressam caraterísticas típicas de hepatócitos diferenciados, incluindo a produção de albumina, transferrina e outras proteínas específicas do fígado, o que as torna um recurso inestimável para a investigação em toxicologia, metabolismo de medicamentos e doenças hepáticas.

A linha celular foi estabelecida a partir de hepatócitos isolados de um ratinho com um transgene para o fator de crescimento transformador humano alfa (TGF-alfa), sob o controlo do promotor da metalotioneína-I do ratinho. Esta alteração genética contribui para a imortalização das células sem perturbar o seu estado diferenciado. As células AML12 mantêm um fenótipo e um cariótipo estáveis em condições normais de cultura de células, o que inclui um requisito único de dexametasona e insulina-transferrina-selénio no meio de crescimento para promover a proliferação e manter as funções específicas dos hepatócitos.

Tecido
Fígado
Aplicações
cultura de células 3D, Rastreio de elevado rendimento, Toxicologia
Sinónimos
  • AML-12
  • AML 12
  • Alpha Mouse Liver 12

02Classificação

Organismo
Rato
Sexo
Masculino
Propriedades de crescimento
Aderente
Estatuto em matéria de OGM
GMO-S1
Detalhes sobre o estatuto dos OGM
GMO-S1: This murine hepatocyte cell line (AML12) contains a human TGF-α transgene introduced by transfection, enabling growth-factor-dependent signaling studies. The insert is stably integrated into hepatocytic cells. This classification applies only within Germany and may differ elsewhere.
Nível de biossegurança
1

03Características

Morfologia
Epitelial
Tipo de célula
Hepatócitos

04Identificadores

Referência
AML12 (número de catálogo Cytion 300643)
Número de identificação fiscal do NCBI
10090
Cellosaurus
CVCL_0140

05Expressão e suscetibilidade

Produtos
As células expressam níveis elevados de TGF alfa humano e níveis mais baixos de TGF alfa de ratinho.

06Manuseamento e cultura

Meio de cultura
DMEM:Ham's F12 (1:1), com: 3,1 g/L de glucose, com: 2,5 mM de L-Glutamina, com: 15 mM de HEPES, com: 0,5 mM de piruvato de sódio, com: 1,2 g/L de NaHCO3 (número de artigo Cytion 820400a)
Atmosfera de incubação

37°C, 5%CO2, atmosfera humidificada.

Suplementos
Suplementar o meio com 10% de FBS, 10 microgramas/mL de insulina, 5,5 microgramas/mL de transferrina, 5 ng/mL de selénio, 40 ng/mL de dexametasona
Reagente de dissociação
Accutase
Subcultura
Retirar o meio antigo das células aderentes e lavá-las com PBS sem cálcio e magnésio. Nos frascos T25, utilizar 3-5 ml de PBS e nos frascos T75, 5-10 ml. Em seguida, cobrir completamente as células com Accutase, utilizando 1-2 ml para os frascos T25 e 2,5 ml para os frascos T75. Deixar as células incubar à temperatura ambiente durante 8-10 minutos para as destacar. Após a incubação, misturar suavemente as células com 10 ml de meio para as ressuspender e, em seguida, centrifugar a 300xg durante 3 minutos. Deitar fora o sobrenadante, ressuspender as células em meio fresco e transferi-las para novos frascos que já contenham meio fresco.
Descongelamento e cultura
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Controlo de qualidade e criopreservação

Esterilidade

A contaminação por micoplasma é excluída utilizando ensaios baseados em PCR e métodos de deteção de micoplasma baseados em luminescência.

Para garantir que não há contaminação bacteriana, fúngica ou de leveduras, as culturas de células são sujeitas a inspecções visuais diárias.

Meio de congelação
Como meio de criopreservação, utilizamos um meio de crescimento completo (incluindo FBS) + 10% DMSO para uma viabilidade pós-descongelamento adequada, ou CM-1 (número de catálogo Cytion 800100), que inclui osmoprotectores optimizados e estabilizadores metabólicos para melhorar a recuperação e reduzir o stress induzido pela crio.
Condições de armazenamento

Para conservação a longo prazo, colocar os frascos em azoto líquido em fase de vapor a uma temperatura entre -150 e -196 °C. O armazenamento a -80 °C é aceitável apenas como um curto passo intermédio antes da transferência para azoto líquido.

Condições de envio

As linhas celulares criopreservadas são expedidas em gelo seco em embalagens validadas e isoladas com refrigerante suficiente para manter aproximadamente -78 °C durante o transporte. Aquando da receção, inspecionar imediatamente o recipiente e transferir sem demora os frascos para um local de armazenamento adequado.

08Doador

Raça / subespécie
Transgénico CD-1 MT42
Idade do dador
3 meses