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A673
Gewebe
Knochen
Krankheit
Ewing-Sarkom
Synonyme
A-673, RMS 1598, RMS1598

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A673

Cell line · Artikelnummer 300454

The A673 cell line is a valuable resource in biological science. Derived from the muscle tissue of a 15-year-old female patient diagnosed with Ewings Sarc...

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01Allgemeine Informationen

Beschreibung

Die A673-Zelllinie ist eine wertvolle Ressource für die biologische Wissenschaft. Sie stammt aus dem Muskelgewebe einer 15-jährigen Patientin, bei der ein Ewings-Sarkom diagnostiziert wurde, und weist eine ausgeprägte polygonale Morphologie auf. Ursprünglich wurde angenommen, dass die Zelllinie von einem Rhabdomyosarkom (RMS) stammt.

Eine der bemerkenswerten Eigenschaften der A673-Zellen ist ihre Fähigkeit, mehrere Wachstumsfaktoren zu produzieren, die ein onkogenes Potenzial besitzen. Diese Zellen sezernieren auch wachstumshemmende Faktoren, die ein ausgewogenes Umfeld für die Regulierung des Zellwachstums schaffen. Diese Eigenschaften machen A673-Zellen zu einem hervorragenden Modell für die Untersuchung des Zusammenspiels zwischen tumorfördernden und tumorunterdrückenden Faktoren. A673-Zellen haben ein tumorigenes Potenzial gezeigt, da sie in immunsupprimierten Mäusen die Bildung von Tumoren auslösen können.

Darüber hinaus wurden in Studien hypermethylierte Promotoren in krebsrelevanten Genen innerhalb der A673-Zelllinie identifiziert. Diese genetischen Veränderungen tragen weiter zu ihrer Bedeutung in der Krebsforschung bei und bieten eine Plattform zur Erforschung epigenetischer Veränderungen und ihrer Auswirkungen auf die Tumorentwicklung und -progression.

A673-Zellen werden häufig als Ewing-Tumor (ET) oder Sarkom (ES) bezeichnet, werden aber auch mit Rhabdomyosarkomen (RMS) in Verbindung gebracht. Die A673-Zelllinie weist einen komplexen Karyotyp mit einer spezifischen Translokation auf, die die Chromosomen 11 und 22 betrifft. Diese Translokation führt zur Fusion der EWS- und FLI1-Gene, was ein charakteristisches genetisches Ereignis bei Ewing-Tumoren ist.

Gewebe
Knochen
Krankheit
Ewing-Sarkom
Synonyme
  • A-673
  • RMS 1598
  • RMS1598

02Klassifizierung

Organismus
Mensch
Sex
Weiblich
Wachstumseigenschaften
Anhänger
Biologische Sicherheitsstufe
1

03Merkmale

Morphologie
Fibroblastenähnlich
Tumorauslösend
Ja, bei immunsupprimierten Mäusen
Verdopplungszeit
28 Stunden

04Bezeichner

Quellenangabe
A673 (Cytion Katalognummer 300454)
NCBI-Steuer-ID
9606
Cellosaurus
CVCL_0080

05Expression und Anfälligkeit

Anfälligkeit für Viren
Hochempfindlich gegenüber humanen Adenoviren

06Handhabung und Kultur

Nährmedium
DMEM, w: 4,5 g/L Glucose, w: 4 mM L-Glutamin, w: 3,7 g/L NaHCO3, w: 1,0 mM Natriumpyruvat (Cytion-Artikelnummer 820300a)
Inkubationsatmosphäre

37°C, 5%CO2, befeuchtete Atmosphäre.

Nahrungsergänzungsmittel
Ergänzen Sie das Medium mit 10% FBS
Dissoziationsreagenz
Accutase
Subkultivierung
Entfernen Sie das alte Medium von den adhärenten Zellen und waschen Sie sie mit PBS, das kein Kalzium und Magnesium enthält. Für T25-Kolben 3-5 ml PBS und für T75-Kolben 5-10 ml verwenden. Anschließend werden die Zellen vollständig mit Accutase bedeckt, wobei 1-2 ml für T25-Kolben und 2,5 ml für T75-Kolben verwendet werden. Lassen Sie die Zellen 8-10 Minuten bei Raumtemperatur inkubieren, um sie abzulösen. Nach der Inkubation mischen Sie die Zellen vorsichtig mit 10 ml Medium, um sie zu resuspendieren, und zentrifugieren sie dann 3 Minuten lang bei 300xg. Den Überstand verwerfen, die Zellen in frischem Medium resuspendieren und in neue Kolben überführen, die bereits frisches Medium enthalten.
Aussaatdichte
1 x 104 Zellen/cm² führen innerhalb von 8 Tagen zu einer konfluenten Monoschicht.
Flüssigkeitswechsel
2 bis 3 Mal pro Woche
Erholung nach dem Auftauen
Nach dem Auftauen die Zellen mit einer Dichte von 5 x 104 Zellen/cm² ausplattieren und die Zellen mindestens 24 Stunden lang vom Gefrierprozess erholen und adhärieren lassen.
Auftauen und Kultivierung
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Qualitätskontrolle und Kryokonservierung

Sterilität

Eine Kontamination mit Mykoplasmen wird sowohl durch PCR-basierte Assays als auch durch lumineszenzbasierte Mykoplasmen-Nachweisverfahren ausgeschlossen.

Um sicherzustellen, dass keine Kontamination mit Bakterien, Pilzen oder Hefen vorliegt, werden die Zellkulturen täglich visuell überprüft.

Gefriermedium
Als Kryokonservierungsmedium verwenden wir komplettes Wachstumsmedium (einschließlich FBS) + 10 % DMSO für eine angemessene Lebensfähigkeit nach dem Auftauen oder CM-1 (Cytion Katalognummer 800100), das optimierte Osmoprotektoren und Stoffwechselstabilisatoren enthält, um die Erholung zu verbessern und kryoinduzierten Stress zu reduzieren.
Lagerbedingungen

Zur Langzeitkonservierung werden die Fläschchen in flüssigem Stickstoff bei etwa -150 bis -196 °C gelagert. Eine Lagerung bei -80 °C ist nur als kurzer Zwischenschritt vor der Überführung in flüssigen Stickstoff akzeptabel.

Versandbedingungen

Kryokonservierte Zelllinien werden auf Trockeneis in einer validierten, isolierten Verpackung mit ausreichend Kühlmittel versandt, um während des gesamten Transports eine Temperatur von etwa -78 °C aufrechtzuerhalten. Prüfen Sie den Behälter bei Erhalt sofort und bringen Sie die Fläschchen unverzüglich in ein geeignetes Lager.

08Spender

Alter des Spenders
15 Jahre
Ethnische Zugehörigkeit
Kaukasisch