Mine otse sisu juurde
A673
Kude
Bone
Haigus
Ewingi sarkoom
Sünonüümid
A-673, RMS 1598, RMS1598

Dokumendid

A673

Cell line · Toote number 300454

The A673 cell line is a valuable resource in biological science. Derived from the muscle tissue of a 15-year-old female patient diagnosed with Ewings Sarc...

€430.00ilma käibemaksu ja saatmiskuludeta
Laos
Lot
Soovitatav (värskeim partii)
  • CoA
1

01Üldine teave

Kirjeldus

A673 rakuliin on väärtuslik ressurss bioloogilises teaduses. See rakuliin on saadud 15-aastase naissoost patsiendi lihaskoest, kellel on diagnoositud Ewingsi sarkoom, ja sellel on selge polügooniline morfoloogia. Algselt arvati, et rakuliin on pärit rabdomüosarkoomist (RMS).

A673 rakkude üks tähelepanuväärseid omadusi on nende võime toota mitmeid onkogeense potentsiaaliga kasvufaktoreid. Need rakud eritavad ka kasvu pärssivaid tegureid, mis tagab tasakaalustatud keskkonna rakkude kasvu reguleerimiseks. Sellised omadused muudavad A673 rakud suurepäraseks mudeliks kasvajat soodustavate ja kasvajat pärssivate faktorite vastastikuse mõju uurimiseks. A673 rakud on näidanud kasvajapotentsiaali, kuna nad võivad immuunsupressiooniga hiirtel tekitada kasvajate teket.

Lisaks sellele on uuringutes tuvastatud A673 rakuliinis vähiga seotud geenide hüpermetüülitud promootoreid. Need geneetilised muutused suurendavad veelgi selle tähtsust vähiuuringutes, pakkudes platvormi epigeneetiliste modifikatsioonide ja nende mõju uurimiseks kasvaja arengule ja progresseerumisele.

Kuigi A673 rakke nimetatakse sageli Ewingi kasvajaks (ET) või sarkoomiks (ES), seostatakse neid ka rabdomüosarkoomiga (RMS). A673 rakuliinil on keerukas karüotüüp, millel on spetsiifiline translokatsioon, mis hõlmab kromosoomi 11 ja 22. See translokatsioon põhjustab EWS ja FLI1 geenide fusiooni, mis on Ewingi kasvajale iseloomulik geneetiline sündmus.

Kude
Bone
Haigus
Ewingi sarkoom
Sünonüümid
  • A-673
  • RMS 1598
  • RMS1598

02Klassifikatsioon

Organism
Inimene
Sugu
Naine
Kasvuvõime
Järgija
Bioloogilise ohutuse tase
1

03Omadused

Morfoloogia
Fibroblastilaadsed
Tuumorigeenne
Jah, immuunsupressiooniga hiirtel
Kahekordistumisaeg
28 tundi

04Tunnused

Viide
A673 (Cytioni katalooginumber 300454)
NCBI maksukood
9606
Cellosaurus
CVCL_0080

05Avaldumine ja vastuvõtlikkus

Viirusele vastuvõtlikkus
Väga tundlik inimese adenoviiruste suhtes

06Käsitlemine ja kasvatamine

Kasvatuskeskkond
DMEM, w: 4,5 g/L glükoosi, w: 4 mM L-glutamiini, w: 3,7 g/L NaHCO3, w: 1,0 mM naatriumpüruvaati (Cytioni artikli number 820300a)
Inkubatsiooni keskkond

37°C, 5%CO2, niisutatud atmosfäär.

Toidulisandid
Täiendada söötme 10% FBS-ga
Dissotsiatsioonireaktiiv
Accutase
Kultuuri edasikasvatamine
Eemaldage kleepunud rakkudelt vana söötme ja peske neid PBS-ga, milles puudub kaltsium ja magneesium. T25 kolbide puhul kasutage 3-5 ml PBS-i ja T75 kolbide puhul 5-10 ml. Seejärel katke rakud täielikult Accutase'iga, kasutades 1-2 ml T25 kolbide puhul ja 2,5 ml T75 kolbide puhul. Laske rakkudel inkubeerida 8-10 minutit toatemperatuuril, et need eralduksid. Pärast inkubeerimist segage rakud ettevaatlikult 10 ml söötmega, et neid resuspenseerida, seejärel tsentrifuugige 3 minutit 300xg juures. Visake supernatant ära, suspenseerige rakud uuesti värskes keskkonnas ja viige need uutesse kolvidesse, mis sisaldavad juba värsket keskkonda.
Külvitihedus
1 x 104 rakku/cm2 annab 8 päeva jooksul tulemuseks konfluentse monokihi.
Vedeliku vahetus
2 kuni 3 korda nädalas
Taastumine pärast sulamist
Pärast sulatamist asetage rakud plaadile tihedusega 5 x 104 rakku/cm2 ja laske rakkudel külmutamisprotsessist taastuda ja kinnituda vähemalt 24 tunni jooksul.
Sulatamine ja kasvatamine
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Kvaliteedikontroll ja krüokonserveerimine

Viljatus

Mükoplasmakontaminatsioon on välistatud nii PCR-põhiste analüüside kui ka luminestsentsil põhinevate mükoplasma tuvastamise meetodite abil.

Bakteriaalse, seene- või pärmsaaste puudumise tagamiseks kontrollitakse rakukultuure iga päev visuaalselt.

Külmutuskeskkond
Krüosäilitusvedelikusena kasutame täielikku kasvukeskkonda (sh FBS) + 10% DMSO, et tagada piisav elujõulisus pärast sulatamist, või CM-1 (Cytioni katalooginumber 800100), mis sisaldab optimeeritud osmoprotektante ja metaboolseid stabilisaatoreid, et parandada taastumist ja vähendada krüostressi.
Säilitamistingimused

Pikaajaliseks säilitamiseks asetage viaalid aurufaasis vedela lämmastikuga umbes -150 kuni -196 °C juures. Säilitamine temperatuuril -80 °C on vastuvõetav ainult lühikese vaheetapina enne vedela lämmastikuga üleviimist.

Tarne- ja kohaletoimetamistingimused

Krüokonserveeritud rakuliinid transporditakse kuiva jääga valideeritud, isoleeritud pakendis, milles on piisavalt külmutusainet, et säilitada kogu transpordi jooksul ligikaudu -78 °C. Vastuvõtmisel kontrollige konteinerit kohe ja viige viaalid viivitamatult sobivasse hoiuruumi.

08Annetaja

Doonori vanus
15 aastat
Etniline kuuluvus
Kaukaasia