Pāriet uz saturu
A673
Audums
Bone
Slimība
Jvinga sarkoma
Sinonīmi
A-673, RMS 1598, RMS1598

Dokumenti

A673

Cell line · Preces numurs 300454

The A673 cell line is a valuable resource in biological science. Derived from the muscle tissue of a 15-year-old female patient diagnosed with Ewings Sarc...

€430.00bez nodokļa un piegādes izmaksām
Noliktavā
Lot
Ieteicams (jaunākā partija)
  • CoA
1

01Vispārīga informācija

Apraksts

A673 šūnu līnija ir vērtīgs bioloģijas zinātnes resurss. Šai šūnu līnijai, kas iegūta no 15 gadus vecas pacientes, kurai diagnosticēta Evinga sarkoma, muskuļu audiem, piemīt izteikta poligonāla morfoloģija. Sākotnēji tika uzskatīts, ka šūnu līnija iegūta no rabdomiosarkomas (RMS).

Viena no A673 šūnu ievērojamām īpašībām ir to spēja ražot vairākus augšanas faktorus, kam piemīt onkogēns potenciāls. Šīs šūnas izdala arī augšanu kavējošus faktorus, nodrošinot līdzsvarotu vidi šūnu augšanas regulēšanai. Šādas īpašības padara A673 šūnas par lielisku modeli, lai pētītu audzēju veicinošo un audzēju nomācošo faktoru mijiedarbību. A673 šūnām ir pierādīts audzēja potenciāls, jo tās var izraisīt audzēja veidošanos imūnsupresētām pelēm.

Turklāt pētījumos ir atklāti hipermetilēti ar vēzi saistīto gēnu promotori A673 šūnu līnijā. Šīs ģenētiskās izmaiņas vēl vairāk palielina tās nozīmi vēža pētniecībā, piedāvājot platformu, lai pētītu epigenētiskās modifikācijas un to ietekmi uz audzēju attīstību un progresēšanu.

Lai gan A673 šūnas bieži dēvē par Jvinga audzēju (ET) vai sarkomu (ES), tās tiek saistītas arī ar rabdomiosarkomu (RMS). A673 šūnu līnijai ir sarežģīts kariotips ar īpašu translokāciju, kas ietver 11. un 22. hromosomu. Šīs translokācijas rezultātā notiek EWS un FLI1 gēnu saplūšana, kas ir raksturīgs Evinga audzēja ģenētisks notikums.

Audums
Bone
Slimība
Jvinga sarkoma
Sinonīmi
  • A-673
  • RMS 1598
  • RMS1598

02Klasifikācija

Organisms
Cilvēks
Sekss
Sieviete
Augšanas īpašības
Atbalstītājs
Bioloģiskās drošības līmenis
1

03Raksturlielumi

Morfoloģija
Fibroblastiem līdzīgs
Tumorogēns
Jā, imunosupresētām pelēm
Laiks, kas nepieciešams, lai skaits dubultojās
28 stundas

04Identifikatori

Atsauce
A673 (Cytion kataloga numurs 300454)
NCBI nodokļu identifikācijas numurs
9606
Cellosaurus
CVCL_0080

05Pazīmes un uzņēmība

Jutība pret vīrusiem
Augsta jutība pret cilvēka adenovīrusiem

06Apstrāde un audzēšana

Barotne
DMEM, w: 4,5 g/l glikozes, w: 4 mM L-glutamīna, w: 3,7 g/l NaHCO3, w: 1,0 mM nātrija piruvāta (Cytion izstrādājuma numurs 820300a)
Inkubācijas vide

37°C, 5%CO2, mitrināta atmosfēra.

Papildinājumi
Papildināt barotni ar 10% FBS
Disociācijas reaģents
Accutase
Pārstādīšana
Noņemt veco barotni no pielipušajām šūnām un mazgāt tās ar PBS, kurā nav kalcija un magnija. T25 kolbām izmantojiet 3-5 ml PBS, bet T75 kolbām - 5-10 ml. Pēc tam pilnībā pārklājiet šūnas ar Accutase, izmantojot 1-2 ml T25 kolbām un 2,5 ml T75 kolbām. Ļaujiet šūnām inkubēties istabas temperatūrā 8-10 minūtes, lai tās atdalītos. Pēc inkubācijas uzmanīgi samaisiet šūnas ar 10 ml barotnes, lai tās atkārtoti suspendētu, pēc tam centrifugējiet 3 minūtes ar 300xg. Izmetiet supernatantu, atkārtoti suspendējiet šūnas svaigā barotnē un pārvietojiet tās jaunās kolbās, kurās jau ir svaiga barotne.
Sēšanas blīvums
1 x 104 šūnas/cm2 izveidos konfluentu monoslāni 8 dienu laikā.
Šķidruma atjaunošana
2 līdz 3 reizes nedēļā
Atgūšanās pēc atkusņa
Pēc atkausēšanas izkliedējiet šūnas uz šķīvja ar blīvumu 5 x 104 šūnas/cm2 un ļaujiet šūnām atgūties no sasaldēšanas procesa un pielipt vismaz 24 stundas.
Atkausēšana un kultivēšana
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Kvalitātes kontrole un kriokonservācija

Sterilitāte

Mikoplazmas piesārņojums tiek izslēgts, izmantojot gan uz PCR balstītus testus, gan uz luminiscenci balstītas mikoplazmas noteikšanas metodes.

Lai pārliecinātos, ka nav baktēriju, sēnīšu vai rauga piesārņojuma, šūnu kultūras katru dienu vizuāli pārbauda.

Saldēšanas barotne
Kā kriokonservēšanas barotni mēs izmantojam pilnvērtīgu augšanas barotni (ieskaitot FBS) + 10 % DMSO, lai nodrošinātu pietiekamu dzīvotspēju pēc atkausēšanas, vai CM-1 (Cytion kataloga numurs 800100), kas ietver optimizētus osmoprotektorus un metaboliskos stabilizatorus, lai uzlabotu atveseļošanos un samazinātu krioinducēto stresu.
Uzglabāšanas nosacījumi

Ilgstošai uzglabāšanai flakonus ievietojiet šķidrā slāpeklī ar tvaika fāzi aptuveni -150 līdz -196 °C temperatūrā. Uzglabāšana -80 °C temperatūrā ir pieļaujama tikai kā īss starpposms pirms pārvietošanas uz šķidro slāpekli.

Piegādes nosacījumi

Kriokonservētas šūnu līnijas tiek sūtītas uz sausā ledus apstiprinātā, izolētā iepakojumā ar pietiekamu dzesēšanas šķidruma daudzumu, lai visā transportēšanas laikā uzturētu aptuveni -78 °C temperatūru. Pēc saņemšanas nekavējoties pārbaudiet iepakojumu un nekavējoties pārvietojiet flakonus uz atbilstošu uzglabāšanas vietu.

08Ziedotājs

Donora vecums
15 gadi
Etniskā piederība
Kaukāzietis