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Lovo-Luc
Gewebe
Metastasen
Krankheit
Adenokarzinom des Dickdarms
Metastasenherd
Linker supraklavikulärer Lymphknoten

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Lovo-Luc

Cell line · Artikelnummer 305682

LoVo-Luc is a bioluminescent derivative of the human LoVo colorectal adenocarcinoma cell line, engineered to stably express a firefly luciferase reporter ...

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01Allgemeine Informationen

Beschreibung

LoVo-Luc ist ein biolumineszentes Derivat der menschlichen LoVo-Zelllinie für kolorektales Adenokarzinom, das so modifiziert wurde, dass es ein Firefly-Luciferase-Reportergen stabil exprimiert. Die ursprüngliche LoVo-Zelllinie wurde aus einem metastasierten linken supraklavikulären Lymphknoten eines kolorektalen Adenokarzinoms bei einem 56-jährigen männlichen Patienten etabliert und ist eine der am häufigsten verwendeten kolorektalen Krebszelllinien in der Krebsforschung. LoVo-Zellen weisen eine epithelähnliche Morphologie auf und zeichnen sich durch Mikrosatelliteninstabilität (MSI), defiziente Mismatch-Reparatur (dMMR) sowie die Expression von Onkogenen wie Myc, myb, ras, fos und p53 aus. Diese Merkmale machen LoVo zu einem relevanten Modell für die Untersuchung der Biologie von kolorektalem Krebs mit defekter Mismatch-Reparatur sowie der therapeutischen Reaktionen, einschließlich der Empfindlichkeit gegenüber einer Immuntherapie.

Die stabile Integration von Luciferase in LoVo-Luc ermöglicht eine empfindliche, quantitative Biolumineszenz-Bildgebung (BLI) der Tumorlast in Xenotransplantatmodellen unter Verwendung immungeschwächter Wirte. Das Lumineszenzsignal korreliert mit der Anzahl lebensfähiger Tumorzellen und ermöglicht so eine nichtinvasive Langzeitüberwachung der Tumoransiedlung, der Wachstumskinetik und des Ansprechens auf die Behandlung. LoVo-Luc ist besonders wertvoll für präklinische Studien zur Bewertung von Immun-Checkpoint-Inhibitoren, Chemotherapeutika und zielgerichteten Therapien im Zusammenhang mit MMR-defizientem Kolorektalkarzinom sowie für das Hochdurchsatz-Wirkstoffscreening und mechanistische Untersuchungen der Biologie des Kolorektalkarzinoms.

LoVo-Luc behält die etablierten molekularen Eigenschaften der Elternlinie LoVo bei, einschließlich ihres MSI-Phänotyps, des Onkogen-Expressionsprofils und der Produktion des karzinoembryonalen Antigens (CEA). Der Luciferase-Reporter erhöht den experimentellen Durchsatz erheblich und ermöglicht eine pharmakodynamische Echtzeit-Bewertung der Wirksamkeit der Behandlung. Forscher sollten vor dem Einsatz in groß angelegten präklinischen Studien die Luziferaseaktivität, den MMR-Status und die Wachstumskinetik unter ihren spezifischen Versuchsbedingungen überprüfen.

Gewebe
Metastasen
Krankheit
Adenokarzinom des Dickdarms
Metastasenherd
Linker supraklavikulärer Lymphknoten

02Klassifizierung

Organismus
Mensch
Sex
Männlich
Wachstumseigenschaften
Anhänger
GVO-Status
GMO-S1
Angaben zum GVO-Status
GMO-S1: This cell line contains a stably integrated firefly luciferase reporter cassette (Luc2, codon-optimized) introduced via replication-incompetent lentiviral transduction. The resulting polyclonal cell population was maintained under puromycin selection (1–5 µg/mL). S1 containment is required. This classification applies only within Germany and may differ elsewhere.
Biologische Sicherheitsstufe
1

03Merkmale

Morphologie
Epithelähnlich
Tumorauslösend
Ja, in Nacktmäusen
Verdopplungszeit
24–48 Stunden

04Bezeichner

Quellenangabe
Lovo-Luc (Cytion-Katalognummer 305682)
NCBI-Steuer-ID
9606
Cellosaurus
CVCL_4Y03

05Expression und Anfälligkeit

Antigenexpression
HLA A11, B15, B17, Cw1, Cw3, Blutgruppe B, Luc2 (Glühwürmchen, codonoptimiert)
Isoenzyme
G6PD, B, PGM1, 2, PGM3, 1-2, 6PGD, A, ES-D, 1
Onkogene
Myc +, myb + , ras +, fos +, p53 +, sis -, abl -, ros -, src -
Mutationsprofil
Mutation: p.Lys437Argfs*5, heterozygot; Mutation: p.Arg1114Ter, heterozygot; Mutation: p.Met1431fs*42, heterozygot; Mutation: p.Arg2816Gln, heterozygot; Mutation: p.Leu15Phefs*41, heterozygot; Mutation: p.Arg505Cys, heterozygot; Mutation: p.Gly13Asp, heterozygot; Mutation: p.Ala292Val, heterozygot; Mutation: p.Lys128Serfs*35, homozygot
Reverse Transkriptase
Negativ
Produkte
Carcinoembryonales Antigen (CEA) 908 ng/106 Zellen/10 Tage

06Handhabung und Kultur

Nährmedium
Ham's F12K Medium, w: 2,0 mM L-Glutamin, w: 2,0 mM Natriumpyruvat, w: 2,5 g/L NaHCO3 (Cytion-Artikelnummer 820608a)
Inkubationsatmosphäre

37°C, 5%CO2, befeuchtete Atmosphäre.

Nahrungsergänzungsmittel
Ergänzen Sie das Medium mit 10% FBS
Dissoziationsreagenz
Accutase
Subkultivierung
Entfernen Sie das alte Medium von den adhärenten Zellen und waschen Sie sie mit PBS, das kein Kalzium und Magnesium enthält. Für T25-Kolben 3-5 ml PBS und für T75-Kolben 5-10 ml verwenden. Anschließend werden die Zellen vollständig mit Accutase bedeckt, wobei 1-2 ml für T25-Kolben und 2,5 ml für T75-Kolben verwendet werden. Lassen Sie die Zellen 8-10 Minuten bei Raumtemperatur inkubieren, um sie abzulösen. Nach der Inkubation mischen Sie die Zellen vorsichtig mit 10 ml Medium, um sie zu resuspendieren, und zentrifugieren sie dann 3 Minuten lang bei 300xg. Den Überstand verwerfen, die Zellen in frischem Medium resuspendieren und in neue Kolben überführen, die bereits frisches Medium enthalten.
Split-Verhältnis
1 bis 3
Aussaatdichte
1–3 × 10⁴/cm²
Flüssigkeitswechsel
2 bis 3 Mal pro Woche
Auftauen und Kultivierung
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 200 x g for 5 minutes, carefully discard the supernatant containing freezing medium.

  7. Follow the procedure described under Post-Thaw Recovery

07Qualitätskontrolle und Kryokonservierung

Gefriermedium
Als Kryokonservierungsmedium verwenden wir vollständiges Wachstumsmedium + 10 % DMSO, um eine angemessene Lebensfähigkeit nach dem Auftauen zu gewährleisten.
Lagerbedingungen

Zur Langzeitkonservierung werden die Fläschchen in flüssigem Stickstoff bei etwa -150 bis -196 °C gelagert. Eine Lagerung bei -80 °C ist nur als kurzer Zwischenschritt vor der Überführung in flüssigen Stickstoff akzeptabel.

Versandbedingungen

Kryokonservierte Zelllinien werden auf Trockeneis in einer validierten, isolierten Verpackung mit ausreichend Kühlmittel versandt, um während des gesamten Transports eine Temperatur von etwa -78 °C aufrechtzuerhalten. Prüfen Sie den Behälter bei Erhalt sofort und bringen Sie die Fläschchen unverzüglich in ein geeignetes Lager.

08Spender

Alter des Spenders
56 Jahre
Ethnische Zugehörigkeit
Kaukasisch