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M2-10B4
Gewebe
Knochenmark
Synonyme
M210B4

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M2-10B4

Cell line · Artikelnummer 400428

The M2-10B4 cell line is a clone derived from bone marrow stromal cells from a (C57BL/6J X C3H/HeJ)F1 mouse. These stromal cells are essential components ...

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01Allgemeine Informationen

Beschreibung

Die M2-10B4-Zelllinie ist ein Klon, der aus Stromazellen des Knochenmarks einer (C57BL/6J X C3H/HeJ)F1-Maus gewonnen wurde. Diese Stromazellen sind wesentliche Bestandteile der Mikroumgebung des Knochenmarks und spielen eine wichtige Rolle bei der Unterstützung der Hämatopoese. Die M2-10B4-Zellen sind besonders wertvoll für die Erforschung der Wechselwirkungen zwischen Stromazellen und hämatopoetischen Zellen, da sie sowohl die menschliche als auch die murine Myelopoese in Langzeitkultur unterstützen können. Darüber hinaus können diese Zellen bestimmte murine stromazellabhängige Prä-B-Zelllinien in vitro aufrechterhalten, was sie zu einem vielseitigen Werkzeug in der hämatopoetischen Forschung macht.

Die M2-10B4-Zellen exprimieren wichtige extrazelluläre Matrixkomponenten wie Laminin und Kollagen IV, die zu ihrer Fähigkeit beitragen, hämatopoetische Zellen zu unterstützen. Allerdings exprimieren sie weder Kollagen I noch Faktor VIII, was sie von anderen Stromazelllinien unterscheidet. Das Vorhandensein von Laminin und Kollagen IV ist entscheidend für die Aufrechterhaltung der Mikroumgebung des Knochenmarks und beeinflusst die Zelladhäsion, die Differenzierung und die Signalwege. Forscher verwenden die M2-10B4-Zelllinie häufig in Co-Kultur-Systemen, um die Auswirkungen von Stromazellen auf das Verhalten hämatopoetischer Vorläuferzellen zu untersuchen, insbesondere im Zusammenhang mit der Physiologie des Knochenmarks und Krankheitsmodellen.

Aufgrund ihres Ursprungs und ihrer funktionellen Eigenschaften sind M2-10B4-Zellen ein wichtiges Modell für die Untersuchung der Knochenmarksnische, insbesondere im Zusammenhang mit hämatologischen Erkrankungen wie Leukämie. Sie sind auch nützlich für das Screening von Medikamenten und die Entwicklung von therapeutischen Strategien, die auf die Mikroumgebung des Knochenmarks abzielen.

Gewebe
Knochenmark
Synonyme
  • M210B4

02Klassifizierung

Organismus
Maus
Sex
Weiblich
Wachstumseigenschaften
Anhänger
Biologische Sicherheitsstufe
1

03Merkmale

Morphologie
Fibroblastenähnlich
Zelltyp
Fibroblasten

04Bezeichner

Quellenangabe
M2-10B4 (Cytion Katalognummer 400428)
NCBI-Steuer-ID
10090
Cellosaurus
CVCL_5794

05Expression und Anfälligkeit

Produkte
Laminin, Kollagen IV (Kollagen I(-), Faktor VIII(-).

06Handhabung und Kultur

Nährmedium
RPMI 1640, w: 2,0 mM stabiles Glutamin, w: 2,0 g/L NaHCO3 (Cytion-Artikelnummer 820700a)
Inkubationsatmosphäre

37°C, 5%CO2, befeuchtete Atmosphäre.

Nahrungsergänzungsmittel
Ergänzen Sie das Medium mit 10% FBS
Dissoziationsreagenz
Accutase
Subkultivierung
Entfernen Sie das alte Medium von den adhärenten Zellen und waschen Sie sie mit PBS, das kein Kalzium und Magnesium enthält. Für T25-Kolben 3-5 ml PBS und für T75-Kolben 5-10 ml verwenden. Anschließend werden die Zellen vollständig mit Accutase bedeckt, wobei 1-2 ml für T25-Kolben und 2,5 ml für T75-Kolben verwendet werden. Lassen Sie die Zellen 8-10 Minuten bei Raumtemperatur inkubieren, um sie abzulösen. Nach der Inkubation mischen Sie die Zellen vorsichtig mit 10 ml Medium, um sie zu resuspendieren, und zentrifugieren sie dann 3 Minuten lang bei 300xg. Den Überstand verwerfen, die Zellen in frischem Medium resuspendieren und in neue Kolben überführen, die bereits frisches Medium enthalten.
Aussaatdichte
1 x 104 Zellen/cm²
Flüssigkeitswechsel
2 bis 3 Mal pro Woche
Erholung nach dem Auftauen
Die Lebensfähigkeit kann nach dem Auftauen gering sein.
Auftauen und Kultivierung
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Qualitätskontrolle und Kryokonservierung

Sterilität

Eine Kontamination mit Mykoplasmen wird sowohl durch PCR-basierte Assays als auch durch lumineszenzbasierte Mykoplasmen-Nachweisverfahren ausgeschlossen.

Um sicherzustellen, dass keine Kontamination mit Bakterien, Pilzen oder Hefen vorliegt, werden die Zellkulturen täglich visuell überprüft.

Gefriermedium
Als Kryokonservierungsmedium verwenden wir komplettes Wachstumsmedium (einschließlich FBS) + 10 % DMSO für eine angemessene Lebensfähigkeit nach dem Auftauen oder CM-1 (Cytion Katalognummer 800100), das optimierte Osmoprotektoren und Stoffwechselstabilisatoren enthält, um die Erholung zu verbessern und kryoinduzierten Stress zu reduzieren.
Lagerbedingungen

Zur Langzeitkonservierung werden die Fläschchen in flüssigem Stickstoff bei etwa -150 bis -196 °C gelagert. Eine Lagerung bei -80 °C ist nur als kurzer Zwischenschritt vor der Überführung in flüssigen Stickstoff akzeptabel.

Versandbedingungen

Kryokonservierte Zelllinien werden auf Trockeneis in einer validierten, isolierten Verpackung mit ausreichend Kühlmittel versandt, um während des gesamten Transports eine Temperatur von etwa -78 °C aufrechtzuerhalten. Prüfen Sie den Behälter bei Erhalt sofort und bringen Sie die Fläschchen unverzüglich in ein geeignetes Lager.

08Spender

Rasse / Unterart
C57BL/6J x C3H/HeJ
Alter des Spenders
Nicht spezifiziert