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M2-10B4
Tecido
Medula óssea
Sinónimos
M210B4

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M2-10B4

Cell line · Número do produto 400428

The M2-10B4 cell line is a clone derived from bone marrow stromal cells from a (C57BL/6J X C3H/HeJ)F1 mouse. These stromal cells are essential components ...

€550.00sem impostos nem portes de envio

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1

01Informações gerais

Descrição

A linha celular M2-10B4 é um clone derivado de células estromais da medula óssea de um ratinho (C57BL/6J X C3H/HeJ)F1. Estas células estromais são componentes essenciais do microambiente da medula óssea e desempenham um papel significativo no apoio à hematopoiese. As células M2-10B4 são particularmente valiosas para a investigação centrada nas interações entre células estromais e hematopoiéticas, uma vez que podem suportar a mielopoiese humana e murina em cultura a longo prazo. Além disso, estas células podem sustentar certas linhas de células pré-B dependentes de células estromais murinas in vitro, o que as torna uma ferramenta versátil na investigação hematopoiética.

As células M2-10B4 expressam componentes importantes da matriz extracelular, como a laminina e o colagénio IV, que contribuem para a sua capacidade de suportar células hematopoiéticas. No entanto, não expressam colagénio I ou fator VIII, o que as distingue de outras linhas de células estromais. A presença de laminina e colagénio IV é fundamental para a manutenção do microambiente da medula óssea, influenciando a adesão, a diferenciação e as vias de sinalização das células. Os investigadores utilizam frequentemente a linha celular M2-10B4 em sistemas de co-cultura para explorar os efeitos das células estromais no comportamento dos progenitores hematopoiéticos, particularmente no contexto da fisiologia da medula óssea e de modelos de doença.

Dada a sua origem e propriedades funcionais, as células M2-10B4 são um modelo essencial para o estudo do nicho da medula óssea, especialmente em relação a doenças hematológicas como a leucemia. São também úteis no rastreio de fármacos e no desenvolvimento de estratégias terapêuticas dirigidas ao microambiente da medula óssea.

Tecido
Medula óssea
Sinónimos
  • M210B4

02Classificação

Organismo
Rato
Sexo
Feminino
Propriedades de crescimento
Aderente
Nível de biossegurança
1

03Características

Morfologia
Tipo fibroblastos
Tipo de célula
Fibroblastos

04Identificadores

Referência
M2-10B4 (número de catálogo Cytion 400428)
Número de identificação fiscal do NCBI
10090
Cellosaurus
CVCL_5794

05Expressão e suscetibilidade

Produtos
Laminina, colagénio IV (colagénio I(-), fator VIII(-).

06Manuseamento e cultura

Meio de cultura
RPMI 1640, com: 2,0 mM de glutamina estável, com: 2,0 g/L NaHCO3 (número de artigo Cytion 820700a)
Atmosfera de incubação

37°C, 5%CO2, atmosfera humidificada.

Suplementos
Completar o meio com 10% de FBS
Reagente de dissociação
Accutase
Subcultura
Retirar o meio antigo das células aderentes e lavá-las com PBS sem cálcio e magnésio. Nos frascos T25, utilizar 3-5 ml de PBS e nos frascos T75, 5-10 ml. Em seguida, cobrir completamente as células com Accutase, utilizando 1-2 ml para os frascos T25 e 2,5 ml para os frascos T75. Deixar as células incubar à temperatura ambiente durante 8-10 minutos para as destacar. Após a incubação, misturar suavemente as células com 10 ml de meio para as ressuspender e, em seguida, centrifugar a 300xg durante 3 minutos. Deitar fora o sobrenadante, ressuspender as células em meio fresco e transferi-las para novos frascos que já contenham meio fresco.
Densidade de sementeira
1 x 104 células/cm2
Renovação de fluidos
2 a 3 vezes por semana
Recuperação após o descongelamento
A viabilidade pode ser baixa após a descongelação.
Descongelamento e cultura
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Controlo de qualidade e criopreservação

Esterilidade

A contaminação por micoplasma é excluída utilizando ensaios baseados em PCR e métodos de deteção de micoplasma baseados em luminescência.

Para garantir que não há contaminação bacteriana, fúngica ou de leveduras, as culturas de células são sujeitas a inspecções visuais diárias.

Meio de congelação
Como meio de criopreservação, utilizamos um meio de crescimento completo (incluindo FBS) + 10% DMSO para uma viabilidade pós-descongelamento adequada, ou CM-1 (número de catálogo Cytion 800100), que inclui osmoprotectores optimizados e estabilizadores metabólicos para melhorar a recuperação e reduzir o stress induzido pela crio.
Condições de armazenamento

Para conservação a longo prazo, colocar os frascos em azoto líquido em fase de vapor a uma temperatura entre -150 e -196 °C. O armazenamento a -80 °C é aceitável apenas como um curto passo intermédio antes da transferência para azoto líquido.

Condições de envio

As linhas celulares criopreservadas são expedidas em gelo seco em embalagens validadas e isoladas com refrigerante suficiente para manter aproximadamente -78 °C durante o transporte. Aquando da receção, inspecionar imediatamente o recipiente e transferir sem demora os frascos para um local de armazenamento adequado.

08Doador

Raça / subespécie
C57BL/6J x C3H/HeJ
Idade do dador
Não especificado