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M2-10B4
Tessuto
Midollo osseo
Sinonimi
M210B4

Documenti

M2-10B4

Cell line · Codice prodotto 400428

The M2-10B4 cell line is a clone derived from bone marrow stromal cells from a (C57BL/6J X C3H/HeJ)F1 mouse. These stromal cells are essential components ...

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Personalizzazione / Suggerimenti

Disponibile
Lotto
Consigliati (partita più recente)
  • CoA
1

01Informazioni generali

Descrizione

La linea cellulare M2-10B4 è un clone derivato da cellule stromali del midollo osseo di un topo (C57BL/6J X C3H/HeJ)F1. Queste cellule stromali sono componenti essenziali del microambiente del midollo osseo e svolgono un ruolo significativo nel sostenere l'emopoiesi. Le cellule M2-10B4 sono particolarmente preziose per la ricerca incentrata sulle interazioni tra cellule stromali ed emopoietiche, in quanto possono sostenere la mielopoiesi umana e murina in colture a lungo termine. Inoltre, queste cellule possono sostenere in vitro alcune linee di cellule pre-B dipendenti da cellule stromali murine, rendendole uno strumento versatile nella ricerca ematopoietica.

Le cellule M2-10B4 esprimono importanti componenti della matrice extracellulare, come la laminina e il collagene IV, che contribuiscono alla loro capacità di sostenere le cellule ematopoietiche. Tuttavia, non esprimono collagene I o Fattore VIII, il che le distingue da altre linee di cellule stromali. La presenza di laminina e collagene IV è fondamentale per il mantenimento del microambiente del midollo osseo, influenzando l'adesione cellulare, la differenziazione e le vie di segnalazione. I ricercatori utilizzano spesso la linea cellulare M2-10B4 in sistemi di co-coltura per esplorare gli effetti delle cellule stromali sul comportamento dei progenitori ematopoietici, in particolare nel contesto della fisiologia del midollo osseo e dei modelli di malattia.

Data la loro origine e le loro proprietà funzionali, le cellule M2-10B4 sono un modello essenziale per lo studio della nicchia del midollo osseo, soprattutto in relazione a patologie ematologiche come la leucemia. Sono inoltre utili per lo screening di farmaci e lo sviluppo di strategie terapeutiche mirate al microambiente del midollo osseo.

Tessuto
Midollo osseo
Sinonimi
  • M210B4

02Classificazione

Organismo
Mouse
Sesso
Donna
Proprietà di crescita
Aderente
Livello di biosicurezza
1

03Caratteristiche

Morfologia
Simile a un fibroblasto
Tipo di cellula
Fibroblasti

04Identificatori

Riferimento bibliografico
M2-10B4 (numero di catalogo Cytion 400428)
Codice fiscale NCBI
10090
Cellosaurus
CVCL_5794

05Espressione e suscettibilità

Prodotti
Laminina, collagene IV (collagene I(-), fattore VIII(-).

06Manipolazione e coltura

Terreno di coltura
RPMI 1640, w: 2,0 mM di glutammina stabile, w: 2,0 g/L di NaHCO3 (articolo Cytion numero 820700a)
Atmosfera di incubazione

37°C, 5%CO2, atmosfera umidificata.

Integratori
Integrare il terreno di coltura con il 10% di FBS
Reagente di dissociazione
Accutase
Subcoltura
Rimuovere il vecchio terreno dalle cellule aderenti e lavarle con PBS privo di calcio e magnesio. Per le fiasche T25, utilizzare 3-5 ml di PBS e per le fiasche T75, 5-10 ml. Quindi, coprire completamente le cellule con Accutase, utilizzando 1-2 ml per le fiasche T25 e 2,5 ml per le fiasche T75. Lasciare incubare le cellule a temperatura ambiente per 8-10 minuti per staccarle. Dopo l'incubazione, mescolare delicatamente le cellule con 10 ml di terreno per risospenderle, quindi centrifugare a 300xg per 3 minuti. Scartare il surnatante, risospendere le cellule in terreno fresco e trasferirle in nuove fiasche contenenti terreno fresco.
Densità di semina
1 x 104 cellule/cm2
Rinnovo dei fluidi
da 2 a 3 volte alla settimana
Recupero post-scongelamento
La vitalità può essere bassa dopo lo scongelamento.
Scongelamento e coltura
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Controllo di qualità e crioconservazione

Sterilità

La contaminazione da micoplasma viene esclusa utilizzando sia saggi basati sulla PCR sia metodi di rilevamento del micoplasma basati sulla luminescenza.

Per garantire l'assenza di contaminazione batterica, fungina o da lieviti, le colture cellulari sono sottoposte a ispezioni visive quotidiane.

Terreno di coltura congelato
Come terreno di crioconservazione, utilizziamo un terreno di crescita completo (incluso FBS) + 10% DMSO per un'adeguata vitalità post-scongelamento, o CM-1 (numero di catalogo Cytion 800100), che include osmoprotettori e stabilizzatori metabolici ottimizzati per migliorare il recupero e ridurre lo stress crio-indotto.
Condizioni di conservazione

Per la conservazione a lungo termine, porre le fiale in azoto liquido in fase vapore a una temperatura compresa tra -150 e -196 °C circa. La conservazione a -80 °C è accettabile solo come breve fase intermedia prima del trasferimento in azoto liquido.

Condizioni di spedizione

Le linee cellulari crioconservate vengono spedite su ghiaccio secco in confezioni isolate e convalidate, con una quantità di refrigerante sufficiente a mantenere circa -78 °C durante il trasporto. Al ricevimento, ispezionare immediatamente il contenitore e trasferire immediatamente le fiale in un luogo di conservazione appropriato.

08Donatore

Razza / sottospecie
C57BL/6J x C3H/HeJ
Età dei donatori
Non specificato