Mine otse sisu juurde
mIMCD-3
Kude
Neer, sisemine medullaarne kogumiskanal
Haigus
Tavaline
Sünonüümid
mIMCD3, IMCD-3, IMCD3, mouse Inner Medullary Collecting Duct-3

Dokumendid

mIMCD-3

Cell line · Toote number 305382

The mIMCD-3 cell line is derived from the murine inner medullary collecting duct and is widely used as a model for studying renal epithelial cell biology,...

€550.00ilma käibemaksu ja saatmiskuludeta
Laos
Lot
Soovitatav (värskeim partii)
  • CoA
1

01Üldine teave

Kirjeldus

Rakuliin mIMCD-3 on saadud hiire neeru sisemise medullaarse kogumiskanali rakkudest ning seda kasutatakse laialdaselt neeruepiteelirakkude bioloogia, neeru arengu ja patofüsioloogia uurimise mudelina. See immortaliseeritud rakuliin ilmutab kogumiskanalile iseloomulikke omadusi, sealhulgas võimet moodustada torukujulisi struktuure 3D-kultuurisüsteemides ning tihedate liideste valkude, akvaporiinide ja epiteelmarkerite ekspressiooni. mIMCD-3 rakud on eriti väärtuslikud ioonide transpordi, vee reguleerimise ja rakkude reaktsiooni mehaanilisele pingele uurimisel, mis teeb neist olulise vahendi nefroloogia uurimistöös.

mIMCD-3 rakke on kasutatud polütsüstilise neeruhaiguse (PKD) uuringutes, et mõista tsüstide tekke molekulaarset alust. Eelkõige on seda rakuliini geneetiliselt modifitseeritud, et uurida polütsüstiinvalkude (PKD1 ja PKD2) rolli, mis on autosoomse domineeriva polütsüstilise neeruhaiguse (ADPKD) peamised tegurid. Näiteks PKD1-st puudust kannatavatel mIMCD-3 rakkudel esineb mehaanilise koormuse korral ebanormaalne tubulite laienemine, mis jäljendab PKD-patsientidel täheldatud tsüstide teket. Lisaks on mIMCD-3 rakkudega läbiviidud katsed näidanud primaarsete tsiliide rolli cAMP-signaalimise ja mehaanilise transduktsiooni vahendamisel – need on neeruepiteeli funktsiooni ja haiguse patoloogia seisukohalt kriitilised protsessid.

Seda rakuliini kasutatakse ka ravimite avastamisel ja katsetamisel, eriti nefrotoksilisuse ja neeruspetsiifiliste ravimeetodite kontekstis. mIMCD-3 rakud pakuvad platvormi reaktsioonide uurimiseks selliste kemoteraapiavahendite suhtes nagu tsisplatiin, mis võivad neerurakkudes esile kutsuda oksüdatiivset stressi ja apoptoosi. Lisaks muudavad mIMCD-3 rakkude tugevad kasvukarakteristikud ja reprodutseeritavus kultuuritingimustes need rakud kohandatavaks mudeliks neerubioloogia erinevate aspektide uurimiseks ja neeruhaiguste ravivõtete arendamiseks.

Kude
Neer, sisemine medullaarne kogumiskanal
Haigus
Tavaline
Sünonüümid
  • mIMCD3
  • IMCD-3
  • IMCD3
  • mouse Inner Medullary Collecting Duct-3

02Klassifikatsioon

Organism
Hiir
Sugu
Määratlemata
Kasvuvõime
Järgija
GMO-staatus
GMO-S1
GMO-staatuse üksikasjad
GMO-S1: This murine inner medullary collecting duct cell line (mIMCD-3) contains an SV40 T-Antigen transgene derived from a transgenic mouse model, supporting immortalization. The construct is stably present in primary kidney-derived cells. This classification applies only within Germany and may differ elsewhere.
Bioloogilise ohutuse tase
2

03Omadused

Morfoloogia
Epiteelilaadsed

04Tunnused

Viide
mIMCD-3 (Cytioni katalooginumber 305382)
NCBI maksukood
10090
Cellosaurus
CVCL_0429

05Avaldumine ja vastuvõtlikkus

Viirused
Transformant: simian virus 40 (SV40)

06Käsitlemine ja kasvatamine

Kasvatuskeskkond
DMEM:Ham's F12 (1:1), w: 3,1 g/L glükoosi, w: 2,5 mM L-glutamiini, w: 15 mM HEPES, w: 0,5 mM naatriumpüruvaati, w: 1,2 g/L NaHCO3 (Cytioni artikli number 820400a)
Inkubatsiooni keskkond

37°C, 5%CO2, niisutatud atmosfäär.

Toidulisandid
Täiendada söötme 10% FBS-ga
Dissotsiatsioonireaktiiv
Accutase
Kultuuri edasikasvatamine
Eemaldage kleepunud rakkudelt vana söötme ja peske neid PBS-ga, milles puudub kaltsium ja magneesium. T25 kolbide puhul kasutage 3-5 ml PBS-i ja T75 kolbide puhul 5-10 ml. Seejärel katke rakud täielikult Accutase'iga, kasutades 1-2 ml T25 kolbide puhul ja 2,5 ml T75 kolbide puhul. Laske rakkudel inkubeerida 8-10 minutit toatemperatuuril, et need eralduksid. Pärast inkubeerimist segage rakud ettevaatlikult 10 ml söötmega, et neid resuspenseerida, seejärel tsentrifuugige 3 minutit 300xg juures. Visake supernatant ära, suspenseerige rakud uuesti värskes keskkonnas ja viige need uutesse kolvidesse, mis sisaldavad juba värsket keskkonda.
Külvitihedus
1–3 × 10⁴ rakku/cm²
Vedeliku vahetus
2 kuni 3 korda nädalas
Taastumine pärast sulamist
Pärast sulatamist asetage rakud plaadile tihedusega 2 kuni 5 x 104 rakku/cm2 ja laske rakkudel külmutamisprotsessist taastuda ja kinnituda vähemalt 24 tunni jooksul.
Sulatamine ja kasvatamine
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Kvaliteedikontroll ja krüokonserveerimine

Viljatus

Mükoplasmakontaminatsioon on välistatud nii PCR-põhiste analüüside kui ka luminestsentsil põhinevate mükoplasma tuvastamise meetodite abil.

Bakteriaalse, seene- või pärmsaaste puudumise tagamiseks kontrollitakse rakukultuure iga päev visuaalselt.

Külmutuskeskkond
Krüosäilitusvedelikusena kasutame täielikku kasvukeskkonda (sh FBS) + 10% DMSO, et tagada piisav elujõulisus pärast sulatamist, või CM-1 (Cytioni katalooginumber 800100), mis sisaldab optimeeritud osmoprotektante ja metaboolseid stabilisaatoreid, et parandada taastumist ja vähendada krüostressi.
Säilitamistingimused

Pikaajaliseks säilitamiseks asetage viaalid aurufaasis vedela lämmastikuga umbes -150 kuni -196 °C juures. Säilitamine temperatuuril -80 °C on vastuvõetav ainult lühikese vaheetapina enne vedela lämmastikuga üleviimist.

Tarne- ja kohaletoimetamistingimused

Krüokonserveeritud rakuliinid transporditakse kuiva jääga valideeritud, isoleeritud pakendis, milles on piisavalt külmutusainet, et säilitada kogu transpordi jooksul ligikaudu -78 °C. Vastuvõtmisel kontrollige konteinerit kohe ja viige viaalid viivitamatult sobivasse hoiuruumi.

08Annetaja

Tõug / alamliik
Tg(SV40E)Bri/7 transgeeniline
Doonori vanus
Täiskasvanud