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mIMCD-3
Tessuto
Rene, dotto collettore medullare interno
Malattia
Normale
Sinonimi
mIMCD3, IMCD-3, IMCD3, mouse Inner Medullary Collecting Duct-3

Documenti

mIMCD-3

Cell line · Codice prodotto 305382

The mIMCD-3 cell line is derived from the murine inner medullary collecting duct and is widely used as a model for studying renal epithelial cell biology,...

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01Informazioni generali

Descrizione

La linea cellulare mIMCD-3 deriva dal dotto collettore medullare interno murino ed è ampiamente utilizzata come modello per lo studio della biologia delle cellule epiteliali renali, dello sviluppo renale e della fisiopatologia. Questa linea cellulare immortalizzata presenta caratteristiche tipiche del dotto collettore, tra cui la capacità di formare strutture tubulari in sistemi di coltura 3D e l’espressione di proteine delle giunzioni strette, acquaporine e marcatori epiteliali. Le cellule mIMCD-3 sono particolarmente preziose per l’esplorazione dei meccanismi di trasporto ionico, della regolazione idrica e della risposta cellulare allo stress meccanico, il che le rende uno strumento essenziale nella ricerca nefrologica.

Le cellule mIMCD-3 sono state utilizzate in studi sulla malattia renale policistica (PKD) per comprendere le basi molecolari della formazione delle cisti. In particolare, questa linea cellulare è stata geneticamente modificata per studiare il ruolo delle proteine policistine (PKD1 e PKD2), che svolgono un ruolo chiave nella malattia renale policistica autosomica dominante (ADPKD). Ad esempio, le cellule mIMCD-3 prive di PKD1 mostrano una dilatazione tubulare anomala sotto stress meccanico, riproducendo la cistogenesi osservata nei pazienti affetti da PKD. Inoltre, esperimenti condotti sulle cellule mIMCD-3 hanno dimostrato il ruolo delle ciglia primarie nella mediazione della segnalazione dell’AMPc e della meccano-trasduzione, processi fondamentali per la funzione epiteliale renale e la patologia della malattia.

Questa linea cellulare viene impiegata anche nella scoperta e nella sperimentazione di farmaci, in particolare nel contesto della nefrotossicità e delle terapie specifiche per il rene. Le cellule mIMCD-3 forniscono una piattaforma per lo studio delle risposte ad agenti chemioterapici come il cisplatino, che può indurre stress ossidativo e apoptosi nelle cellule renali. Inoltre, le loro solide caratteristiche di crescita e la riproducibilità in condizioni di coltura rendono le cellule mIMCD-3 un modello versatile per lo studio di diversi aspetti della biologia renale e per il progresso degli approcci terapeutici nelle malattie renali.

Tessuto
Rene, dotto collettore medullare interno
Malattia
Normale
Sinonimi
  • mIMCD3
  • IMCD-3
  • IMCD3
  • mouse Inner Medullary Collecting Duct-3

02Classificazione

Organismo
Mouse
Sesso
Non specificato
Proprietà di crescita
Aderente
Presenza di OGM
GMO-S1
Dettagli sullo stato degli OGM
GMO-S1: This murine inner medullary collecting duct cell line (mIMCD-3) contains an SV40 T-Antigen transgene derived from a transgenic mouse model, supporting immortalization. The construct is stably present in primary kidney-derived cells. This classification applies only within Germany and may differ elsewhere.
Livello di biosicurezza
2

03Caratteristiche

Morfologia
Simile all'epitelio

04Identificatori

Riferimento bibliografico
mIMCD-3 (codice catalogo Cytion 305382)
Codice fiscale NCBI
10090
Cellosaurus
CVCL_0429

05Espressione e suscettibilità

Virus
Trasformante: Simian virus 40 (SV40)

06Manipolazione e coltura

Terreno di coltura
DMEM:Ham's F12 (1:1), w: 3,1 g/L di glucosio, w: 2,5 mM di L-Glutammina, w: 15 mM di HEPES, w: 0,5 mM di Sodio piruvato, w: 1,2 g/L di NaHCO3 (articolo Cytion numero 820400a)
Atmosfera di incubazione

37°C, 5%CO2, atmosfera umidificata.

Integratori
Integrare il terreno di coltura con il 10% di FBS
Reagente di dissociazione
Accutase
Subcoltura
Rimuovere il vecchio terreno dalle cellule aderenti e lavarle con PBS privo di calcio e magnesio. Per le fiasche T25, utilizzare 3-5 ml di PBS e per le fiasche T75, 5-10 ml. Quindi, coprire completamente le cellule con Accutase, utilizzando 1-2 ml per le fiasche T25 e 2,5 ml per le fiasche T75. Lasciare incubare le cellule a temperatura ambiente per 8-10 minuti per staccarle. Dopo l'incubazione, mescolare delicatamente le cellule con 10 ml di terreno per risospenderle, quindi centrifugare a 300xg per 3 minuti. Scartare il surnatante, risospendere le cellule in terreno fresco e trasferirle in nuove fiasche contenenti terreno fresco.
Densità di semina
da 1 a 3 × 10⁴ cellule/cm²
Rinnovo dei fluidi
da 2 a 3 volte alla settimana
Recupero post-scongelamento
Dopo lo scongelamento, piastrare le cellule a una densità compresa tra 2 e 5 x 104 cellule/cm2 e lasciare che le cellule si riprendano dal processo di congelamento e aderiscano per almeno 24 ore.
Scongelamento e coltura
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Controllo di qualità e crioconservazione

Sterilità

La contaminazione da micoplasma viene esclusa utilizzando sia saggi basati sulla PCR sia metodi di rilevamento del micoplasma basati sulla luminescenza.

Per garantire l'assenza di contaminazione batterica, fungina o da lieviti, le colture cellulari sono sottoposte a ispezioni visive quotidiane.

Terreno di coltura congelato
Come terreno di crioconservazione, utilizziamo un terreno di crescita completo (incluso FBS) + 10% DMSO per un'adeguata vitalità post-scongelamento, o CM-1 (numero di catalogo Cytion 800100), che include osmoprotettori e stabilizzatori metabolici ottimizzati per migliorare il recupero e ridurre lo stress crio-indotto.
Condizioni di conservazione

Per la conservazione a lungo termine, porre le fiale in azoto liquido in fase vapore a una temperatura compresa tra -150 e -196 °C circa. La conservazione a -80 °C è accettabile solo come breve fase intermedia prima del trasferimento in azoto liquido.

Condizioni di spedizione

Le linee cellulari crioconservate vengono spedite su ghiaccio secco in confezioni isolate e convalidate, con una quantità di refrigerante sufficiente a mantenere circa -78 °C durante il trasporto. Al ricevimento, ispezionare immediatamente il contenitore e trasferire immediatamente le fiale in un luogo di conservazione appropriato.

08Donatore

Razza / sottospecie
Tg(SV40E)Bri/7 transgenico
Età dei donatori
Adulti