Siirry sisältöön
Kudos
Keuhkot
Sairaus
Adenokarsinooma
Metastaasikohde
Imusolmuke
Synonyymit
H2009, H-2009, NCIH2009

Asiakirjat

NCI-H2009

Cell line · Tuotenumero 305283

€0.00ilman veroja ja toimituskuluja
Varastossa
Lot
Suositeltava (tuorein erä)
  • CoA
1

01Yleistä tietoa

Kuvaus

NCI-H2009-solulinja on peräisin ihmisen ei-pienisoluista keuhkosyövästä (NSCLC), tarkemmin sanottuna adenokarsinoomasta. Tätä solulinjaa käytetään laajasti keuhkosyövän tutkimuksessa adenokarsinooman, NSCLC:n yleisin alatyyppi, taustalla olevien molekyyli- ja solumekanismien tutkimiseen. NCI-H2009-solut ovat arvokkaita keuhkoadenokarsinoomaan liittyvien geneettisten mutaatioiden, signaalinsiirtoreittien ja terapeuttisten vasteiden tutkimisessa.

NCI-H2009-solut ovat morfologialtaan epiteelisoluja ja ilmentävät keuhkoadenokarsinoomalle tyypillisiä merkkiaineita, kuten sytokeratineja ja karsinoembryonaalista antigeeniä (CEA). Niissä esiintyy NSCLC:ssä usein havaittavia geneettisiä muutoksia, kuten mutaatioita KRAS-geenissä, joka on keskeinen solujen signalointiin, kasvuun ja selviytymiseen. Tutkijat käyttävät NCI-H2009-soluja tutkiakseen keuhkosyövän etenemiseen liittyviä keskeisiä signaalinvälitysteitä, kuten EGFR-, KRAS- ja PI3K/Akt-reittejä. Näitä soluja käytetään myös suurikapasiteettisissa lääkeaineiden seulontatesteissä ja kemoterapeuttisten aineiden, kohdennettujen hoitojen ja immunoterapioiden prekliinisissä testeissä. Lisäksi NCI-H2009-soluja käytetään lääkeresistenssin mekanismien tutkimiseen ja sen voittamiseen tarkoitettujen strategioiden kehittämiseen. NCI-H2009-solulinjan merkitys keuhkojen adenokarsinooman tutkimuksessa korostaa sen tärkeyttä keuhkosyövän biologian ymmärtämisen edistämisessä ja uusien, tehokkaampien hoitomenetelmien kehittämisessä NSCLC-potilaille.

Kudos
Keuhkot
Sairaus
Adenokarsinooma
Metastaasikohde
Imusolmuke
Synonyymit
  • H2009
  • H-2009
  • NCIH2009

02Luokittelu

Organismi
Ihminen
Sukupuoli
Nainen
Kasvuominaisuudet
Kiinnittynyt
Bioturvallisuustaso
1

03Ominaisuudet

Morfologia
Epiteeli

04Tunnisteet

Lähdeviite
NCI-H2009 (Cytion-tuotenumero 305283)
NCBI-verotunnus
9606
Cellosaurus
CVCL_1514

05Ilmentyminen ja alttius

Mutaatioprofiili
Mutaatiot: B2M, p.Met1Val (c.1A>G), heterotsygoottinen; Mutaatiot: B2M, p.Gln28Ter (c.82C>T), heterotsygoottinen; Mutaatiot: KRAS, p.Gly12Ala (c.35G>C), heterotsygoottinen; Mutaatio: TERT, c.1-124C>T (c.228C>T) (C228T); Mutaatio: TP53, p.Arg273Leu (c.818G>T), homotsygoottinen
Virukset
Muuntaja: Epstein-Barr-virus (EBV)

06Käsittely ja viljely

Viljelyalusta

HITES-kasvatusaine, täydennetty

Tämän solulinjan perusviljelyalusta on DF12. Täydellisen kasvualustan valmistamiseksi lisää perusviljelyalustaan seuraavat komponentit:

  • 0,005 mg/ml insuliinia
  • 0,01 mg/ml transferriini
  • 30 nM natriumseleniitti (lopullinen pitoisuus)
  • 10 nM hydrokortisoni (lopullinen pitoisuus)
  • 10 nM beeta-estradioli (lopullinen pitoisuus)
  • Lisäksi 2 mM L-glutamiinia (lopullinen pitoisuus 4,5 mM)
  • 5 % sikiön naudan seerumia (lopullinen pitoisuus)
Inkubaatioilma

37 °C, 5 %CO2, kostutettu ilmakehä.

Dissosiaatioreagenssi
Accutase
Soluviljely
Poista vanha väliaine tarttuneista soluista ja pese ne PBS:llä, josta puuttuu kalsiumia ja magnesiumia. Käytä T25-pulloissa 3-5 ml PBS:ää ja T75-pulloissa 5-10 ml. Peitä sitten solut kokonaan Accutase-valmisteella, käyttäen 1-2 ml T25-pulloissa ja 2,5 ml T75-pulloissa. Anna solujen inkuboitua huoneenlämmössä 8-10 minuuttia solujen irtoamiseksi. Inkuboinnin jälkeen solut sekoitetaan varovasti 10 ml:n väliaineella niiden resuspendoimiseksi ja sentrifugoidaan sitten 300xg:n nopeudella 3 minuutin ajan. Hävitä supernatantti, suspendoi solut uudelleen tuoreeseen väliaineeseen ja siirrä ne uusiin pulloihin, jotka sisältävät jo tuoretta väliaineita.
Nesteen uusiminen
2-3 kertaa viikossa
Sulatus ja viljely
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Laadunvalvonta ja kryosäilytys

Hedelmättömyys

Mykoplasmakontaminaatio suljetaan pois sekä PCR-pohjaisilla määrityksillä että luminesenssiin perustuvilla mykoplasman osoitusmenetelmillä.

Bakteeri-, sieni- tai hiivakontaminaation välttämiseksi soluviljelmät tarkastetaan päivittäin silmämääräisesti.

Jäädytysaine
Kryosäilytysmediana käytämme täydellistä kasvualustaa (mukaan lukien FBS) + 10 % DMSO:ta riittävän sulatuksen jälkeisen elinkelpoisuuden varmistamiseksi tai CM-1:tä (Cytionin luettelonumero 800100), joka sisältää optimoituja osmoprotectantteja ja metabolisia stabilisaattoreita, jotka parantavat elpymistä ja vähentävät kryosäilytyksen aiheuttamaa stressiä.
Säilytysolosuhteet

Pitkäaikaissäilytystä varten injektiopullot asetetaan höyryfaasissa olevaan nestemäiseen typpeen noin -150 - -196 °C:een. Säilytys -80 °C:ssa on hyväksyttävää vain lyhyenä välivaiheena ennen siirtoa nestemäiseen typpeen.

Toimitusehdot

Kryosäilytetyt solulinjat kuljetetaan kuivajäässä validoidussa, eristetyssä pakkauksessa, jossa on riittävästi kylmäainetta, jotta lämpötila pysyy noin -78 °C:ssa koko kuljetuksen ajan. Pakkaus on tarkastettava välittömästi sen vastaanottamisen jälkeen ja injektiopullot on siirrettävä viipymättä asianmukaiseen varastoon.

08Lahjoittaja

Luovuttajan ikä
68 vuotta
Etnisyys
Eurooppalainen