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Tessuto
Polmone
Malattia
Adenocarcinoma
Sito metastatico
Linfonodo
Sinonimi
H2009, H-2009, NCIH2009

Documenti

NCI-H2009

Cell line · Codice prodotto 305283

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Disponibile
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  • CoA
1

01Informazioni generali

Descrizione

La linea cellulare NCI-H2009 deriva da un carcinoma polmonare umano non a piccole cellule (NSCLC), nello specifico un adenocarcinoma. Questa linea cellulare è ampiamente utilizzata nella ricerca sul cancro del polmone per studiare i meccanismi molecolari e cellulari alla base dell'adenocarcinoma, il sottotipo più comune di NSCLC. Le cellule NCI-H2009 sono preziose per studiare le mutazioni genetiche, le vie di trasduzione del segnale e le risposte terapeutiche associate all'adenocarcinoma polmonare.

Le cellule NCI-H2009 presentano una morfologia epiteliale ed esprimono marcatori caratteristici dell'adenocarcinoma polmonare, tra cui le citocheratine e l'antigene carcinoembrionale (CEA). Presentano alterazioni genetiche frequentemente osservate nel NSCLC, come mutazioni nel gene KRAS, che è fondamentale per la segnalazione, la crescita e la sopravvivenza delle cellule. I ricercatori utilizzano le cellule NCI-H2009 per esplorare le principali vie di segnalazione coinvolte nella progressione del cancro al polmone, come le vie EGFR, KRAS e PI3K/Akt. Queste cellule sono anche impiegate in saggi di screening di farmaci ad alto rendimento e in test preclinici di agenti chemioterapici, terapie mirate e immunoterapie. Inoltre, le cellule NCI-H2009 sono utilizzate per studiare i meccanismi di resistenza ai farmaci e per sviluppare strategie per superarli. La rilevanza della linea cellulare NCI-H2009 nella ricerca sull'adenocarcinoma polmonare evidenzia la sua importanza nel far progredire la comprensione della biologia del cancro del polmone e nello sviluppo di nuovi e più efficaci approcci terapeutici per i pazienti affetti da NSCLC.

Tessuto
Polmone
Malattia
Adenocarcinoma
Sito metastatico
Linfonodo
Sinonimi
  • H2009
  • H-2009
  • NCIH2009

02Classificazione

Organismo
Umano
Sesso
Donna
Proprietà di crescita
Aderente
Livello di biosicurezza
1

03Caratteristiche

Morfologia
Epiteliale

04Identificatori

Riferimento bibliografico
NCI-H2009 (catalogo Cytion numero 305283)
Codice fiscale NCBI
9606
Cellosaurus
CVCL_1514

05Espressione e suscettibilità

Profilo mutazionale
Mutazione: B2M, p.Met1Val (c.1A>G), eterozigote; Mutazione: B2M, p.Gln28Ter (c.82C>T), eterozigote; Mutazione: KRAS, p.Gly12Ala (c.35G>C), eterozigote; Mutazione: TERT, c.1-124C>T (c.228C>T) (C228T); Mutazione: TP53, p.Arg273Leu (c.818G>T), omozigote
Virus
Trasformante: Virus di Epstein-Barr (EBV)

06Manipolazione e coltura

Terreno di coltura

Terreno HITES integrato

Il terreno di base per questa linea cellulare è DF12. Per preparare il terreno di coltura completo, aggiungere i seguenti componenti al terreno di base:

  • 0,005 mg/ml di insulina
  • 0,01 mg/ml di transferrina
  • 30 nM selenito di sodio (conc. finale)
  • 10 nM idrocortisone (conc. finale)
  • 10 nM beta-estradiolo (conc. finale)
  • Extra 2 mM L-glutammina (per una concentrazione finale di 4,5 mM)
  • 5% siero fetale bovino (conc. finale)
Atmosfera di incubazione

37°C, 5%CO2, atmosfera umidificata.

Reagente di dissociazione
Accutase
Subcoltura
Rimuovere il vecchio terreno dalle cellule aderenti e lavarle con PBS privo di calcio e magnesio. Per le fiasche T25, utilizzare 3-5 ml di PBS e per le fiasche T75, 5-10 ml. Quindi, coprire completamente le cellule con Accutase, utilizzando 1-2 ml per le fiasche T25 e 2,5 ml per le fiasche T75. Lasciare incubare le cellule a temperatura ambiente per 8-10 minuti per staccarle. Dopo l'incubazione, mescolare delicatamente le cellule con 10 ml di terreno per risospenderle, quindi centrifugare a 300xg per 3 minuti. Scartare il surnatante, risospendere le cellule in terreno fresco e trasferirle in nuove fiasche contenenti terreno fresco.
Rinnovo dei fluidi
da 2 a 3 volte alla settimana
Scongelamento e coltura
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Controllo di qualità e crioconservazione

Sterilità

La contaminazione da micoplasma viene esclusa utilizzando sia saggi basati sulla PCR sia metodi di rilevamento del micoplasma basati sulla luminescenza.

Per garantire l'assenza di contaminazione batterica, fungina o da lieviti, le colture cellulari sono sottoposte a ispezioni visive quotidiane.

Terreno di coltura congelato
Come terreno di crioconservazione, utilizziamo un terreno di crescita completo (incluso FBS) + 10% DMSO per un'adeguata vitalità post-scongelamento, o CM-1 (numero di catalogo Cytion 800100), che include osmoprotettori e stabilizzatori metabolici ottimizzati per migliorare il recupero e ridurre lo stress crio-indotto.
Condizioni di conservazione

Per la conservazione a lungo termine, porre le fiale in azoto liquido in fase vapore a una temperatura compresa tra -150 e -196 °C circa. La conservazione a -80 °C è accettabile solo come breve fase intermedia prima del trasferimento in azoto liquido.

Condizioni di spedizione

Le linee cellulari crioconservate vengono spedite su ghiaccio secco in confezioni isolate e convalidate, con una quantità di refrigerante sufficiente a mantenere circa -78 °C durante il trasporto. Al ricevimento, ispezionare immediatamente il contenitore e trasferire immediatamente le fiale in un luogo di conservazione appropriato.

08Donatore

Età dei donatori
68 anni
Etnia
Europeo