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Tecido
Pulmão
Doença
Adenocarcinoma
Local da metástase
Nódulo linfático
Sinónimos
H2009, H-2009, NCIH2009

Documentos

NCI-H2009

Cell line · Número do produto 305283

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Recomendado (lote mais recente)
  • CoA
1

01Informações gerais

Descrição

A linha celular NCI-H2009 é derivada de um carcinoma pulmonar não pequenas células (NSCLC) humano, especificamente um adenocarcinoma. Esta linha celular é amplamente utilizada na investigação do cancro do pulmão para estudar os mecanismos moleculares e celulares subjacentes ao adenocarcinoma, o subtipo mais comum de NSCLC. As células NCI-H2009 são valiosas para investigar mutações genéticas, vias de transdução de sinal e respostas terapêuticas associadas ao adenocarcinoma pulmonar.

As células NCI-H2009 apresentam uma morfologia epitelial e expressam marcadores característicos do adenocarcinoma pulmonar, incluindo citoqueratinas e antígeno carcinoembrionário (CEA). Elas abrigam alterações genéticas frequentemente observadas no NSCLC, como mutações no gene KRAS, que é fundamental na sinalização, crescimento e sobrevivência celular. Os investigadores utilizam as células NCI-H2009 para explorar vias de sinalização importantes envolvidas na progressão do cancro do pulmão, como as vias EGFR, KRAS e PI3K/Akt. Estas células também são empregadas em ensaios de triagem de medicamentos de alto rendimento e testes pré-clínicos de agentes quimioterapêuticos, terapias direcionadas e imunoterapias. Além disso, as células NCI-H2009 são utilizadas para estudar mecanismos de resistência a medicamentos e desenvolver estratégias para superá-la. A relevância da linha celular NCI-H2009 na investigação do adenocarcinoma pulmonar destaca a sua importância no avanço da nossa compreensão da biologia do cancro do pulmão e no desenvolvimento de abordagens de tratamento novas e mais eficazes para pacientes com NSCLC.

Tecido
Pulmão
Doença
Adenocarcinoma
Local da metástase
Nódulo linfático
Sinónimos
  • H2009
  • H-2009
  • NCIH2009

02Classificação

Organismo
Humano
Sexo
Feminino
Propriedades de crescimento
Aderente
Nível de biossegurança
1

03Características

Morfologia
Epitelial

04Identificadores

Referência
NCI-H2009 (número de catálogo Cytion 305283)
Número de identificação fiscal do NCBI
9606
Cellosaurus
CVCL_1514

05Expressão e suscetibilidade

Perfil mutacional
Mutação: B2M, p.Met1Val (c.1A>G), heterozigótica; Mutação: B2M, p.Gln28Ter (c.82C>T), heterozigótica; Mutação: KRAS, p.Gly12Ala (c.35G>C), heterozigótica; Mutação: TERT, c.1-124C>T (c.228C>T) (C228T); Mutação: TP53, p.Arg273Leu (c.818G>T), homozigótica
Vírus
Transformante: Vírus Epstein-Barr (EBV)

06Manuseamento e cultura

Meio de cultura

Meio HITES suplementado

O meio base para esta linha celular é DF12. Para preparar o meio de crescimento completo, adicione os seguintes componentes ao meio base:

  • 0,005 mg/ml de insulina
  • 0,01 mg/ml de transferrina
  • 30 nM Selenito de sódio (conc. final)
  • 10 nM Hidrocortisona (conc. final)
  • 10 nM beta-estradiol (conc. final)
  • 2 mM L-glutamina extra (para conc. final de 4,5 mM)
  • 5% de soro fetal bovino (concentração final)
Atmosfera de incubação

37°C, 5%CO2, atmosfera humidificada.

Reagente de dissociação
Accutase
Subcultura
Retirar o meio antigo das células aderentes e lavá-las com PBS sem cálcio e magnésio. Nos frascos T25, utilizar 3-5 ml de PBS e nos frascos T75, 5-10 ml. Em seguida, cobrir completamente as células com Accutase, utilizando 1-2 ml para os frascos T25 e 2,5 ml para os frascos T75. Deixar as células incubar à temperatura ambiente durante 8-10 minutos para as destacar. Após a incubação, misturar suavemente as células com 10 ml de meio para as ressuspender e, em seguida, centrifugar a 300xg durante 3 minutos. Deitar fora o sobrenadante, ressuspender as células em meio fresco e transferi-las para novos frascos que já contenham meio fresco.
Renovação de fluidos
2 a 3 vezes por semana
Descongelamento e cultura
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Controlo de qualidade e criopreservação

Esterilidade

A contaminação por micoplasma é excluída utilizando ensaios baseados em PCR e métodos de deteção de micoplasma baseados em luminescência.

Para garantir que não há contaminação bacteriana, fúngica ou de leveduras, as culturas de células são sujeitas a inspecções visuais diárias.

Meio de congelação
Como meio de criopreservação, utilizamos um meio de crescimento completo (incluindo FBS) + 10% DMSO para uma viabilidade pós-descongelamento adequada, ou CM-1 (número de catálogo Cytion 800100), que inclui osmoprotectores optimizados e estabilizadores metabólicos para melhorar a recuperação e reduzir o stress induzido pela crio.
Condições de armazenamento

Para conservação a longo prazo, colocar os frascos em azoto líquido em fase de vapor a uma temperatura entre -150 e -196 °C. O armazenamento a -80 °C é aceitável apenas como um curto passo intermédio antes da transferência para azoto líquido.

Condições de envio

As linhas celulares criopreservadas são expedidas em gelo seco em embalagens validadas e isoladas com refrigerante suficiente para manter aproximadamente -78 °C durante o transporte. Aquando da receção, inspecionar imediatamente o recipiente e transferir sem demora os frascos para um local de armazenamento adequado.

08Doador

Idade do dador
68 anos
Etnia
Europeu