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NRK-EGFP-H2B
Tissu
Rein
Synonymes
NRK EGFP-H2B

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NRK-EGFP-H2B

Cell line · Référence du produit 500724

La lignée cellulaire NRK-EGFP-H2B est une variante génétiquement modifiée de cellules rénales normales de rat (NRK) qui expriment de manière stable la protéine fluorescente verte améliorée (...

€800.00hors taxes et frais de port
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1

01Informations générales

Description

La lignée cellulaire NRK-EGFP-H2B est une variante génétiquement modifiée des cellules rénales normales de rat (NRK) qui expriment de façon stable la protéine fluorescente verte améliorée (EGFP) fusionnée à l'histone H2B. Cette modification permet de visualiser en temps réel la chromatine et la dynamique nucléaire, ce qui fait de cette lignée cellulaire un outil précieux pour l'étude de la progression du cycle cellulaire, de la mitose et de l'organisation de la chromatine. L'expression stable d'EGFP-H2B fournit un signal fluorescent brillant et constant, facilitant l'imagerie à haute résolution des cellules vivantes et permettant aux chercheurs de suivre les événements nucléaires avec une grande précision.

Les cellules NRK, qui proviennent du tissu rénal d'un rat adulte, sont largement utilisées en biologie cellulaire en raison de leurs caractéristiques de croissance robustes et de leurs comportements physiologiques bien documentés. L'introduction de la protéine de fusion EGFP-H2B dans ces cellules ne modifie pas de manière significative leur croissance ou leur morphologie, ce qui permet d'obtenir des conditions expérimentales fiables et reproductibles. Cette lignée cellulaire est particulièrement utile pour l'étude de la biologie des cellules rénales, des réponses cellulaires au stress et des mécanismes de la cancérogenèse, étant donné le rôle du rein dans la filtration du sang et l'excrétion des déchets. En outre, les capacités de fluorescence des cellules NRK-EGFP-H2B peuvent être exploitées dans des applications de criblage de médicaments afin d'observer en temps réel les effets des médicaments sur la prolifération cellulaire et la morphologie nucléaire.

Tissu
Rein
Synonymes
  • NRK EGFP-H2B

02Classification

Organisme
Rat
Propriétés de croissance
Adepte
Niveau de biosécurité
1

03Caractéristiques

Morphologie
Cellules de forme fusiforme ressemblant à des fibroblastes

04Identifiants

Référence
NRK-EGFP-H2B (numéro de catalogue Cytion 500724)
Numéro d'identification fiscale NCBI
10116
Cellosaurus
CVCL_AV92
Déposant
Le laboratoire Ellenberg (EMBL)

05Expression et sensibilité

Récepteurs exprimés
Facteur de croissance épidermique (EGF), activité stimulant la multiplication (MSA)
Expression des protéines
EGFP-H2B : Localisation/Gène : 1..589 / Pcmv, 613..1329 / EGFP, 1387..1764 / H2B, 3001..3795 / KanR/NeoR
Produits
Facteur de croissance épidermique (EGF), activité stimulant la multiplication (MSA), promoteur CMV Histone H2B, Néomycine, Phosphotransférase

06Manipulation et culture

Milieu de culture
DMEM, w : 4.5 g/L Glucose, w : 4 mM L-Glutamine, w : 3.7 g/L NaHCO3, w : 1.0 mM Pyruvate de sodium (numéro d'article Cytion 820300a)
Atmosphère d'incubation

37°C, 5%CO2, atmosphère humidifiée.

Compléments alimentaires
Compléter le milieu avec 10 % de FBS, 0,5 mg/mL de G418
Réactif de dissociation
Accutase
Repiquage
Jeter l'ancien milieu et laver les cellules avec du PBS. Ajouter une solution fraîchement préparée de 0,025 % de trypsine/0,02 % d'EDTA chauffée à 37 degrés Celsius et attendre que les cellules se détachent, ce qui prend généralement environ 5 minutes. Neutraliser la trypsine en ajoutant du milieu frais, puis transférer le mélange de cellules dans un tube et centrifuger. Après centrifugation, éliminer le surnageant, remettre le culot cellulaire en suspension dans du milieu de culture frais et transférer la suspension dans de nouveaux flacons. Incorporer G418 dans le milieu de culture pour obtenir une concentration finale de 0,5 mg/ml
Densité de semis
2 à 4 x 104 cellules/cm2
Renouvellement des fluides
2 à 3 fois par semaine
Décongélation et mise en culture
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Contrôle qualité et cryoconservation

Stérilité

La contamination par les mycoplasmes est exclue à l'aide de tests basés sur la PCR et de méthodes de détection des mycoplasmes basées sur la luminescence.

Pour s'assurer de l'absence de contamination bactérienne, fongique ou levurienne, les cultures cellulaires font l'objet d'inspections visuelles quotidiennes.

Milieu de congélation
Comme milieu de cryoconservation, nous utilisons un milieu de croissance complet (comprenant du FBS) + 10 % de DMSO pour une viabilité adéquate après décongélation, ou CM-1 (numéro de catalogue 800100 de Cytion), qui comprend des osmoprotectants et des stabilisateurs métaboliques optimisés pour améliorer la récupération et réduire le stress induit par la cryogénisation.
Conditions de stockage

Pour une conservation à long terme, placer les flacons dans de l'azote liquide en phase vapeur à une température comprise entre -150 et -196 °C environ. Le stockage à -80 °C n'est acceptable qu'en tant qu'étape intermédiaire de courte durée avant le transfert dans l'azote liquide.

Conditions de livraison

Les lignées cellulaires cryoconservées sont expédiées sur glace sèche dans des emballages isolés et validés, avec suffisamment de réfrigérant pour maintenir une température d'environ -78 °C tout au long du transport. À la réception, inspecter immédiatement le conteneur et transférer sans délai les flacons dans un lieu de stockage approprié.

08Donateur

Race / sous-espèce
OsborneMendel