Przejdź do treści
NRK-EGFP-H2B
Chusteczka
Nerka
Synonimy
NRK EGFP-H2B

Dokumenty

NRK-EGFP-H2B

Cell line · Numer produktu 500724

Linia komórkowa NRK-EGFP-H2B stanowi genetycznie zmodyfikowaną odmianę normalnych komórek nerki szczura (NRK), które stabilnie wyrażają białko o wzmocnionej zielonej fluorescencji (...

€800.00bez podatku i kosztów wysyłki
Wykonane na zamówienie
1

01Informacje ogólne

Opis

Linia komórkowa NRK-EGFP-H2B jest genetycznie zmodyfikowanym wariantem normalnych szczurzych komórek nerkowych (NRK), które stabilnie wyrażają wzmocnione zielone białko fluorescencyjne (EGFP) połączone z histonem H2B. Modyfikacja ta pozwala na wizualizację chromatyny i dynamiki jądrowej w czasie rzeczywistym, czyniąc tę linię komórkową nieocenionym narzędziem do badania progresji cyklu komórkowego, mitozy i organizacji chromatyny. Stabilna ekspresja EGFP-H2B zapewnia jasny i spójny sygnał fluorescencyjny, ułatwiając obrazowanie żywych komórek w wysokiej rozdzielczości i umożliwiając naukowcom monitorowanie zdarzeń jądrowych z dużą precyzją.

Komórki NRK, pochodzące z tkanki nerkowej dorosłego szczura, są szeroko stosowane w biologii komórkowej ze względu na ich silne właściwości wzrostu i dobrze udokumentowane zachowania fizjologiczne. Wprowadzenie białka fuzyjnego EGFP-H2B do tych komórek nie zmienia znacząco ich wzrostu ani morfologii, pozwalając na wiarygodne i powtarzalne warunki eksperymentalne. Ta linia komórkowa jest szczególnie przydatna w badaniach biologii komórek nerkowych, odpowiedzi komórkowych na stres i mechanizmów kancerogenezy, biorąc pod uwagę rolę nerek w filtrowaniu krwi i wydalaniu odpadów. Dodatkowo, zdolność komórek NRK-EGFP-H2B do fluorescencji może być wykorzystana w badaniach przesiewowych leków w celu obserwacji wpływu leków na proliferację komórek i morfologię jądrową w czasie rzeczywistym.

Chusteczka
Nerka
Synonimy
  • NRK EGFP-H2B

02Klasyfikacja

Organizm
Szczur
Właściwości związane ze wzrostem
Zwolennik
Poziom bezpieczeństwa biologicznego
1

03Cechy charakterystyczne

Morfologia
Komórki podobne do fibroblastów o wrzecionowatym kształcie

04Identyfikatory

Źródło
NRK-EGFP-H2B (numer katalogowy Cytion 500724)
Numer identyfikacji podatkowej NCBI
10116
Cellosaurus
CVCL_AV92
Wkładca
Laboratorium Ellenberg (EMBL)

05Ekspresja i podatność

Receptory ulegające ekspresji
Epidermalny czynnik wzrostu (EGF), aktywność stymulująca namnażanie (MSA)
Ekspresja białek
EGFP-H2B: Lokalizacja/gen: 1..589 / Pcmv, 613..1329 / EGFP, 1387..1764 / H2B, 3001..3795 / KanR/NeoR
Produkty
Naskórkowy czynnik wzrostu (EGF), aktywność stymulująca namnażanie (MSA), promotor CMV Histon H2B, neomycyna, fosfotransferaza

06Postępowanie i hodowla

Pożywka hodowlana
DMEM, w: 4,5 g/l glukozy, w: 4 mM L-glutaminy, w: 3,7 g/l NaHCO3, w: 1,0 mM pirogronianu sodu (numer artykułu Cytion 820300a)
Atmosfera inkubacyjna

37°C, 5%CO2, nawilżona atmosfera.

Suplementy
Uzupełnić podłoże 10% FBS, 0,5 mg/ml G418
Odczynnik dysocjacyjny
Accutase
Hodowla komórek w subkulturze
Wyrzucić starą pożywkę i przepłukać komórki PBS. Dodaj świeżo przygotowany 0,025% roztwór trypsyny/0,02% EDTA podgrzany do 37 stopni Celsjusza i poczekaj, aż komórki się odłączą, co zwykle zajmuje około 5 minut. Zneutralizować trypsynę przez dodanie świeżej pożywki, a następnie przenieść mieszaninę komórek do probówki i odwirować. Po odwirowaniu usunąć supernatant, ponownie zawiesić osad komórkowy w świeżej pożywce i przenieść zawiesinę do nowych kolb. Dodać G418 do podłoża hodowlanego, aby osiągnąć końcowe stężenie 0,5 mg/ml
Gęstość wysiewu
2 do 4 x 104 komórek/cm2
Odnawianie płynów
2 do 3 razy w tygodniu
Rozmrażanie i hodowla
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Kontrola jakości i kriokonserwacja

Bezpłodność

Zanieczyszczenie mykoplazmą jest wykluczane przy użyciu zarówno testów opartych na PCR, jak i metod wykrywania mykoplazmy opartych na luminescencji.

Aby upewnić się, że nie ma zanieczyszczenia bakteriami, grzybami lub drożdżami, hodowle komórkowe są poddawane codziennym kontrolom wizualnym.

Pożywka do zamrażania
Jako pożywki do kriokonserwacji używamy kompletnej pożywki wzrostowej (w tym FBS) + 10% DMSO w celu zapewnienia odpowiedniej żywotności po rozmrożeniu lub CM-1 (numer katalogowy Cytion 800100), która zawiera zoptymalizowane osmoprotektanty i stabilizatory metaboliczne w celu zwiększenia regeneracji i zmniejszenia stresu wywołanego kriokonserwacją.
Warunki przechowywania

W celu długotrwałego przechowywania należy umieścić fiolki w ciekłym azocie w fazie lotnej w temperaturze od -150 do -196 °C. Przechowywanie w temperaturze -80 °C jest dopuszczalne tylko jako krótki etap przejściowy przed przeniesieniem do ciekłego azotu.

Warunki wysyłki

Linie komórkowe poddane kriokonserwacji są wysyłane w suchym lodzie w zatwierdzonych, izolowanych opakowaniach z wystarczającą ilością czynnika chłodniczego, aby utrzymać temperaturę około -78°C przez cały czas transportu. Po otrzymaniu przesyłki należy natychmiast sprawdzić pojemnik i bezzwłocznie przenieść fiolki do odpowiedniego miejsca przechowywania.

08Darczyńca

Rasa / podgatunek
OsborneMendel