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NRK-EGFP-H2B
Tecido
Rim
Sinónimos
NRK EGFP-H2B

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NRK-EGFP-H2B

Cell line · Número do produto 500724

A linha celular NRK-EGFP-H2B é uma variante geneticamente modificada de células renais normais de rato (NRK) que expressam de forma estável a proteína fluorescente verde melhorada (...

€800.00sem impostos nem portes de envio
Feito por encomenda
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01Informações gerais

Descrição

A linha de células NRK-EGFP-H2B é uma variante geneticamente modificada de células normais de rim de rato (NRK) que expressam de forma estável a proteína fluorescente verde melhorada (EGFP) fundida com a histona H2B. Esta modificação permite a visualização em tempo real da cromatina e da dinâmica nuclear, tornando esta linha celular uma ferramenta inestimável para o estudo da progressão do ciclo celular, da mitose e da organização da cromatina. A expressão estável de EGFP-H2B fornece um sinal fluorescente brilhante e consistente, facilitando a imagiologia de células vivas de alta resolução e permitindo aos investigadores monitorizar eventos nucleares com grande precisão.

As células NRK, provenientes do tecido renal de um rato adulto, são amplamente utilizadas em biologia celular devido às suas caraterísticas de crescimento robustas e comportamentos fisiológicos bem documentados. A introdução da proteína de fusão EGFP-H2B nestas células não altera significativamente o seu crescimento ou morfologia, permitindo condições experimentais fiáveis e reprodutíveis. Esta linha celular é particularmente útil em estudos da biologia das células renais, das respostas celulares ao stress e dos mecanismos de carcinogénese, dado o papel do rim na filtragem do sangue e na excreção de resíduos. Além disso, as capacidades de fluorescência das células NRK-EGFP-H2B podem ser aproveitadas em aplicações de rastreio de medicamentos para observar os efeitos dos medicamentos na proliferação celular e na morfologia nuclear em tempo real.

Tecido
Rim
Sinónimos
  • NRK EGFP-H2B

02Classificação

Organismo
Rato
Propriedades de crescimento
Aderente
Nível de biossegurança
1

03Características

Morfologia
Células semelhantes a fibroblastos com forma fusiforme

04Identificadores

Referência
NRK-EGFP-H2B (número de catálogo 500724 da Cytion)
Número de identificação fiscal do NCBI
10116
Cellosaurus
CVCL_AV92
Depositante
O Laboratório Ellenberg (EMBL)

05Expressão e suscetibilidade

Receptores expressos
Fator de crescimento epidérmico (EGF), atividade estimuladora da multiplicação (MSA)
Expressão proteica
EGFP-H2B: Localização/Gene: 1..589 / Pcmv, 613..1329 / EGFP, 1387..1764 / H2B, 3001..3795 / KanR/NeoR
Produtos
Fator de crescimento epidérmico (EGF), atividade estimuladora da multiplicação (MSA), CMV Promotor Histona H2B, Neomicina, Fosfotransferase

06Manuseamento e cultura

Meio de cultura
DMEM, com: 4,5 g/L de glucose, com: 4 mM de L-Glutamina, com: 3,7 g/L de NaHCO3, com: 1,0 mM de piruvato de sódio (número de artigo Cytion 820300a)
Atmosfera de incubação

37°C, 5%CO2, atmosfera humidificada.

Suplementos
Suplementar o meio com 10% de FBS, 0,5 mg/mL de G418
Reagente de dissociação
Accutase
Subcultura
Deitar fora o meio antigo e lavar as células com PBS. Adicionar uma solução recém-preparada de tripsina a 0,025%/0,02% de EDTA aquecida a 37 graus Celsius e aguardar até que as células se desprendam, o que normalmente demora cerca de 5 minutos. Neutralizar a tripsina adicionando meio fresco e, em seguida, transferir a mistura de células para um tubo e centrifugar. Após a centrifugação, remover o sobrenadante, ressuspender o pellet de células em meio de cultura fresco e transferir a suspensão para novos frascos. Incorporar G418 no meio de cultura para obter uma concentração final de 0,5 mg/ml
Densidade de sementeira
2 a 4 x 104 células/cm2
Renovação de fluidos
2 a 3 vezes por semana
Descongelamento e cultura
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Controlo de qualidade e criopreservação

Esterilidade

A contaminação por micoplasma é excluída utilizando ensaios baseados em PCR e métodos de deteção de micoplasma baseados em luminescência.

Para garantir que não há contaminação bacteriana, fúngica ou de leveduras, as culturas de células são sujeitas a inspecções visuais diárias.

Meio de congelação
Como meio de criopreservação, utilizamos um meio de crescimento completo (incluindo FBS) + 10% DMSO para uma viabilidade pós-descongelamento adequada, ou CM-1 (número de catálogo Cytion 800100), que inclui osmoprotectores optimizados e estabilizadores metabólicos para melhorar a recuperação e reduzir o stress induzido pela crio.
Condições de armazenamento

Para conservação a longo prazo, colocar os frascos em azoto líquido em fase de vapor a uma temperatura entre -150 e -196 °C. O armazenamento a -80 °C é aceitável apenas como um curto passo intermédio antes da transferência para azoto líquido.

Condições de envio

As linhas celulares criopreservadas são expedidas em gelo seco em embalagens validadas e isoladas com refrigerante suficiente para manter aproximadamente -78 °C durante o transporte. Aquando da receção, inspecionar imediatamente o recipiente e transferir sem demora os frascos para um local de armazenamento adequado.

08Doador

Raça / subespécie
OsborneMendel