Skip to content
NRK-EGFP-H2B
Tissue
ไต
Synonyms
NRK EGFP-H2B

Documents

NRK-EGFP-H2B

Cell line · Product number 500724

The NRK-EGFP-H2B cell line is a genetically modified variant of normal rat kidney (NRK) cells that stably express the enhanced green fluorescent protein (...

€800.00excl. tax and shipping

Customization / Recommendations

Made to order
1

01General information

Description

เซลล์ไลน์ NRK-EGFP-H2B เป็นเซลล์ไลน์ที่ถูกดัดแปลงทางพันธุกรรมจากเซลล์ไตของหนูปกติ (NRK) ที่สามารถแสดงโปรตีนเรืองแสงสีเขียวแบบเพิ่มประสิทธิภาพ (EGFP) ที่เชื่อมต่อกับฮิสโตน H2B ได้อย่างคงที่ การดัดแปลงนี้ช่วยให้สามารถมองเห็นโครมาตินและการเคลื่อนไหวของนิวเคลียสได้แบบเรียลไทม์ ทำให้เซลล์ไลน์นี้กลายเป็นเครื่องมือที่มีคุณค่าอย่างยิ่งสำหรับการศึกษาการก้าวหน้าของวงจรเซลล์ การแบ่งเซลล์แบบไมโทซิส และการจัดระเบียบโครมาตินการแสดงออกที่คงที่ของ EGFP-H2B ให้สัญญาณฟลูออเรสเซนต์ที่สว่างและสม่ำเสมอ ช่วยให้สามารถถ่ายภาพเซลล์ที่มีชีวิตด้วยความละเอียดสูง และทำให้นักวิจัยสามารถติดตามเหตุการณ์ในนิวเคลียสได้อย่างแม่นยำ

เซลล์ NRK ซึ่งมีต้นกำเนิดจากเนื้อเยื่อไตของหนูโตเต็มวัย ถูกนำมาใช้อย่างแพร่หลายในชีววิทยาเซลล์ เนื่องจากมีลักษณะการเจริญเติบโตที่แข็งแรงและพฤติกรรมทางสรีรวิทยาที่ได้รับการบันทึกไว้เป็นอย่างดี การนำโปรตีนฟิวชั่น EGFP-H2B เข้าสู่เซลล์เหล่านี้ไม่ทำให้การเจริญเติบโตหรือรูปร่างของเซลล์เปลี่ยนแปลงอย่างมีนัยสำคัญ จึงสามารถสร้างสภาวะการทดลองที่เชื่อถือได้และทำซ้ำได้เซลล์ไลน์นี้มีประโยชน์อย่างยิ่งในการศึกษาชีววิทยาของเซลล์ไต การตอบสนองของเซลล์ต่อความเครียด และกลไกการเกิดมะเร็ง เนื่องจากบทบาทของไตในการกรองเลือดและขับของเสีย นอกจากนี้ ความสามารถในการเรืองแสงของเซลล์ NRK-EGFP-H2B ยังสามารถนำมาใช้ในการคัดกรองยาเพื่อสังเกตผลของยาต่อการเพิ่มจำนวนเซลล์และรูปร่างของนิวเคลียสแบบเรียลไทม์

Tissue
ไต
Synonyms
  • NRK EGFP-H2B

02Classification

Organism
Rat
Growth properties
Adherent
Biosafety level
1

03Characteristics

Morphology
เซลล์คล้ายไฟโบรบลาสต์ที่มีรูปร่างเป็นรูปทรงกระบอก

04Identifiers

Citation
NRK-EGFP-H2B (หมายเลขแคตตาล็อก Cytion 500724)
NCBI TaxID
10116
Cellosaurus
CVCL_AV92
Depositor
ห้องปฏิบัติการเอลเลนเบิร์ก (EMBL)

05Expression and susceptibility

Receptors expressed
ปัจจัยการเจริญเติบโตของผิวหนัง (EGF), กิจกรรมกระตุ้นการเพิ่มจำนวน (MSA)
Protein expression
EGFP-H2B: ตำแหน่ง/ยีน: 1..589 / Pcmv, 613..1329 / EGFP, 1387..1764 / H2B, 3001..3795 / KanR/NeoR
Products
ปัจจัยการเจริญเติบโตของผิวหนัง (EGF), กิจกรรมกระตุ้นการเพิ่มจำนวน (MSA), โปรโมเตอร์ CMV ฮิสโตน H2B, นีโอไมซิน, ฟอสโฟทรานสเฟอเรส

06Handling and culture

Culture medium
DMEM, w: 4.5 กรัม/ลิตร กลูโคส, w: 4 มิลลิโมลาร์ แอล-กลูตามีน, w: 3.7 กรัม/ลิตร NaHCO3, w: 1.0 มิลลิโมลาร์ โซเดียมไพรูเวต (หมายเลขบทความ Cytion 820300a)
Incubation atmosphere

37°C, 5%CO2, บรรยากาศชื้น

Supplements
เติมสารอาหารในอาหารเลี้ยงเชื้อด้วย FBS 10%, G418 0.5 มก./มล.
Dissociation reagent
แอคคูเทส
Subculturing
ทิ้งสื่อกลางเก่าและล้างเซลล์ด้วย PBS เติมสารละลายทริปซิน/EDTA 0.025%/0.02% ที่เตรียมใหม่และอุ่นที่อุณหภูมิ 37 องศาเซลเซียส แล้วรอจนกว่าเซลล์จะหลุดออก ซึ่งโดยปกติจะใช้เวลาประมาณ 5 นาทีทำให้ทริปซินเป็นกลางโดยเติมอาหารเลี้ยงเชื้อใหม่ จากนั้นถ่ายส่วนผสมของเซลล์ลงในหลอดและปั่นเหวี่ยง หลังจากปั่นเหวี่ยงแล้ว ให้แยกส่วนใสออก ละลายตะกอนเซลล์ในอาหารเลี้ยงเชื้อใหม่ แล้วถ่ายสารแขวนลอยลงในขวดเลี้ยงเชื้อใหม่ ผสม G418 ลงในอาหารเลี้ยงเชื้อให้ได้ความเข้มข้นสุดท้าย 0.5 มก./มล.
Seeding density
2 ถึง 4 x 104 เซลล์/ซม.
Fluid renewal
2 ถึง 3 ครั้งต่อสัปดาห์
Thawing and culturing

  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Quality control and cryopreservation

Sterility

การปนเปื้อนของไมโคพลาสมาถูกตัดออกโดยใช้ทั้งการทดสอบแบบ PCR และการตรวจหาไมโคพลาสมาโดยใช้วิธีการเรืองแสง

เพื่อให้แน่ใจว่าไม่มีการปนเปื้อนของแบคทีเรีย เชื้อรา หรือยีสต์ การเพาะเลี้ยงเซลล์จะถูกตรวจสอบด้วยสายตาทุกวัน

Freeze medium
ในฐานะที่เป็นสารอาหารสำหรับการแช่แข็ง เราใช้สารอาหารสำหรับการเจริญเติบโตแบบครบถ้วน (รวมถึง FBS) + 10% DMSO เพื่อความมีชีวิตหลังการละลายที่เพียงพอ หรือ CM-1 (หมายเลขแคตตาล็อก Cytion 800100) ซึ่งรวมถึงสารป้องกันออสโมติกและสารรักษาเสถียรภาพเมตาบอลิซึมที่ได้รับการปรับให้เหมาะสมเพื่อเพิ่มการฟื้นตัวและลดความเครียดที่เกิดจากการแช่แข็ง
Storage conditions

สำหรับการเก็บรักษาในระยะยาว ให้วางหลอดบรรจุในไนโตรเจนเหลวในสถานะไอที่อุณหภูมิประมาณ −150 ถึง −196 °C การเก็บรักษาที่อุณหภูมิ −80 °C สามารถใช้ได้เฉพาะในระยะสั้นก่อนการย้ายไปยังไนโตรเจนเหลวเท่านั้น

Shipping conditions

เซลล์ไลน์ที่แช่แข็งในไนโตรเจนเหลวจะถูกจัดส่งในบรรจุภัณฑ์ที่ผ่านการตรวจสอบแล้วและมีการเก็บรักษาความเย็นด้วยน้ำแข็งแห้ง พร้อมสารทำความเย็นที่เพียงพอเพื่อรักษาอุณหภูมิประมาณ −78 °C ตลอดการขนส่ง เมื่อได้รับสินค้า ให้ตรวจสอบภาชนะทันทีและถ่ายโอนหลอดทดลองไปยังที่เก็บที่เหมาะสมโดยไม่ล่าช้า

08Donor

Breed / subspecies
ออสบอร์น เมนเดล