Ga naar de inhoud
NRK-EGFP-H2B
Weefsel
Nieren
Synoniemen
NRK EGFP-H2B

Documenten

NRK-EGFP-H2B

Cell line · Productnummer 500724

De NRK-EGFP-H2B-cellijn is een genetisch gemodificeerde variant van normale rattenniercellen (NRK) die op stabiele wijze het versterkte groene fluorescerende eiwit tot expressie brengen (...

€800.00excl. btw en verzendkosten
Op bestelling gemaakt
1

01Algemene informatie

Beschrijving

De NRK-EGFP-H2B cellijn is een genetisch gemodificeerde variant van normale rattenniercellen (NRK) die stabiel het enhanced green fluorescent protein (EGFP), samengesmolten met histon H2B, tot expressie brengt. Deze modificatie maakt real-time visualisatie van chromatine en nucleaire dynamiek mogelijk, waardoor deze cellijn van onschatbare waarde is voor het bestuderen van celcyclusprogressie, mitose en chromatineorganisatie. De stabiele expressie van EGFP-H2B zorgt voor een helder en consistent fluorescerend signaal, waardoor live-cel beeldvorming met hoge resolutie mogelijk wordt en onderzoekers de nucleaire gebeurtenissen met grote precisie kunnen volgen.

NRK-cellen, afkomstig uit het nierweefsel van een volwassen rat, worden veel gebruikt in de celbiologie vanwege hun robuuste groeikenmerken en goed gedocumenteerde fysiologische gedrag. De introductie van het fusie-eiwit EGFP-H2B in deze cellen verandert hun groei of morfologie niet significant, waardoor betrouwbare en reproduceerbare experimentele omstandigheden mogelijk zijn. Deze cellijn is vooral nuttig bij studies naar de biologie van niercellen, reacties van cellen op stress en mechanismen van carcinogenese, gezien de rol van de nier bij het filteren van bloed en het uitscheiden van afvalstoffen. Daarnaast kunnen de fluorescentiemogelijkheden van NRK-EGFP-H2B cellen worden gebruikt voor het screenen van medicijnen om de effecten van medicijnen op celproliferatie en kernmorfologie in real-time te observeren.

Weefsel
Nieren
Synoniemen
  • NRK EGFP-H2B

02Classificatie

Organisme
Rat
Groei-eigenschappen
Aanhanger
Bioveiligheidsniveau
1

03Kenmerken

Morfologie
Fibroblast-achtige cellen met spoelvormige vorm

04Identificatiegegevens

Bronvermelding
NRK-EGFP-H2B (Cytion catalogusnummer 500724)
NCBI-belastingnummer
10116
Cellosaurus
CVCL_AV92
Inlegger
Het Ellenberg Lab (EMBL)

05Expressie en vatbaarheid

Tot expressie gebrachte receptoren
Epidermale groeifactor (EGF), vermeerderingsstimulerende activiteit (MSA)
Eiwit-expressie
EGFP-H2B: Locatie/gen: 1..589 / Pcmv, 613..1329 / EGFP, 1387..1764 / H2B, 3001..3795 / KanR/NeoR
Producten
Epidermale groeifactor (EGF), Vermenigvuldigingsstimulerende activiteit (MSA), CMV Promotor Histon H2B, Neomycine, Fosfotransferase

06Behandeling en kweek

Kweekmedium
DMEM, w: 4,5 g/L Glucose, w: 4 mM L-Glutamine, w: 3,7 g/L NaHCO3, w: 1,0 mM Natriumpyruvaat (Cytion artikelnummer 820300a)
Incubatieomgeving

37°C, 5%CO2, bevochtigde atmosfeer.

Supplementen
Vul het medium aan met 10% FBS, 0,5 mg/mL G418
Dissociatiereagens
Accutase
Heruitplanten
Gooi het oude medium weg en was de cellen met PBS. Voeg een vers bereide 0,025% trypsine/0,02% EDTA-oplossing verwarmd tot 37 graden Celsius toe en wacht tot de cellen loskomen, wat meestal ongeveer 5 minuten duurt. Neutraliseer de trypsine door vers medium toe te voegen, breng het celmengsel over naar een buis en centrifugeer. Verwijder na het centrifugeren het supernatant, resuspendeer de celpellet in vers kweekmedium en breng de suspensie over naar nieuwe kolven. Voeg G418 toe aan het kweekmedium om een eindconcentratie van 0,5 mg/ml te bereiken
Zaaidichtheid
2 tot 4 x 104 cellen/cm2
Vloeistofverversing
2 tot 3 keer per week
Ontdooien en kweken
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Kwaliteitscontrole en cryopreservatie

Onvruchtbaarheid

Mycoplasmaverontreiniging wordt uitgesloten met zowel PCR-gebaseerde testen als op luminescentie gebaseerde mycoplasmadetectiemethoden.

Om er zeker van te zijn dat er geen besmetting is met bacteriën, schimmels of gisten, worden de celculturen dagelijks onderworpen aan visuele inspecties.

Kweekmedium invriezen
Als cryoconserveringsmedium gebruiken we volledig groeimedium (inclusief FBS) + 10% DMSO voor voldoende levensvatbaarheid na het ontdooien, of CM-1 (Cytion catalogusnummer 800100), dat geoptimaliseerde osmoprotectanten en metabolische stabilisatoren bevat om het herstel te verbeteren en door cryo geïnduceerde stress te verminderen.
Opslagvoorwaarden

Voor langdurige bewaring plaatst u flesjes in vloeibare stikstof in dampfase bij ongeveer -150 tot -196 °C. Opslag bij -80 °C is alleen aanvaardbaar als korte tussenstap vóór overbrenging naar vloeibare stikstof.

Verzendvoorwaarden

Gecryopreserveerde cellijnen worden verzonden op droog ijs in gevalideerde, geïsoleerde verpakkingen met voldoende koelmiddel om gedurende het transport ongeveer -78 °C te handhaven. Inspecteer de verpakking onmiddellijk na ontvangst en breng de flacons onverwijld over naar de juiste opslagplaats.

08Donateur

Soort / ondersoort
OsborneMendel