Pereiti prie turinio
NRK-EGFP-H2B
Audinys
Inkstai
Sinonimai
NRK EGFP-H2B

Dokumentai

NRK-EGFP-H2B

Cell line · Prekės numeris 500724

NRK-EGFP-H2B ląstelių linija yra genetiškai modifikuotas normalių žiurkių inkstų (NRK) ląstelių variantas, kuriame stabiliai ekspresuojamas sustiprintas žaliasis fluorescencinis baltymas (...

€800.00neįskaitant mokesčių ir pristatymo išlaidų
Pagaminta pagal užsakymą
1

01Bendra informacija

Aprašymas

NRK-EGFP-H2B ląstelių linija yra genetiškai modifikuotas normalių žiurkių inkstų (NRK) ląstelių variantas, stabiliai ekspresuojantis sustiprintą žaliąjį fluorescuojantį baltymą (EGFP), sujungtą su histonu H2B. Ši modifikacija leidžia realiuoju laiku vizualizuoti chromatino ir branduolio dinamiką, todėl ši ląstelių linija yra neįkainojamas įrankis ląstelių ciklo eigai, mitozės ir chromatino organizacijai tirti. Stabili EGFP-H2B raiška užtikrina ryškų ir nuoseklų fluorescencinį signalą, palengvina didelės skiriamosios gebos gyvų ląstelių vaizdavimą ir leidžia mokslininkams labai tiksliai stebėti branduolinius įvykius.

NRK ląstelės, kilusios iš suaugusių žiurkių inkstų audinio, plačiai naudojamos ląstelės biologijoje dėl jų tvirtų augimo savybių ir gerai dokumentuotos fiziologinės elgsenos. EGFP-H2B sintezės baltymo įvedimas į šias ląsteles iš esmės nekeičia jų augimo ar morfologijos, todėl galima užtikrinti patikimas ir atkuriamas eksperimentines sąlygas. Ši ląstelių linija ypač naudinga tiriant inkstų ląstelių biologiją, ląstelių atsaką į stresą ir kancerogenezės mechanizmus, atsižvelgiant į inkstų vaidmenį filtruojant kraują ir šalinant atliekas. Be to, NRK-EGFP-H2B ląstelių fluorescencinės savybės gali būti panaudotos atliekant vaistų atrankinę patikrą, kad realiuoju laiku būtų galima stebėti vaistų poveikį ląstelių dauginimuisi ir branduolio morfologijai.

Audinys
Inkstai
Sinonimai
  • NRK EGFP-H2B

02Klasifikacija

Organizmas
Žiurkė
Augimo savybės
Prisijungęs
Biologinio saugumo lygis
1

03Charakteristikos

Morfologija
Į fibroblastus panašios ląstelės, kurių forma yra susiliejanti

04Identifikatoriai

Nuoroda
NRK-EGFP-H2B (Cytion katalogo numeris 500724)
NCBI mokesčių identifikavimo kodas
10116
Cellosaurus
CVCL_AV92
Indėlininkas
Ellenbergo laboratorija (EMBL)

05Išraiška ir jautrumas

Išreikšti receptoriai
Epidermio augimo veiksnys (EGF), dauginimąsi skatinantis aktyvumas (MSA)
Baltojų baltymų ekspresija
EGFP-H2B: Vieta/genas: 1..589 / Pcmv, 613..1329 / EGFP, 1387..1764 / H2B, 3001..3795 / KanR/NeoR
Produktai
Epidermio augimo faktorius (EGF), dauginimąsi skatinantis aktyvumas (MSA), CMV Promotor Histonas H2B, neomicinas, fosfotransferazė

06Laikymas ir auginimas

Maitinamoji terpė
DMEM, š: 4,5 g/l gliukozės, š: 4 mM L-glutamino, š: 3,7 g/l NaHCO3, š: 1,0 mM natrio piruvato (Cytion gaminio numeris 820300a)
Inkubacijos aplinka

37 °C, 5 %CO2, drėkintoje atmosferoje.

Maisto papildai
Papildykite terpę 10 % FBS, 0,5 mg/ml G418
Disociacijos reagentas
Accutase
Subkultūrinis auginimas
Išmeskite seną terpę ir nuplaukite ląsteles PBS. Įpilkite šviežiai paruošto 0,025 % tripsino/0,02 % EDTA tirpalo, pašildyto iki 37 °C temperatūros, ir palaukite, kol ląstelės atsiskirs (paprastai tai trunka apie 5 minutes). Neutralizuokite tripsiną, įpilkite šviežios terpės, tada perkelkite ląstelių mišinį į mėgintuvėlį ir centrifuguokite. Po centrifugavimo pašalinkite supernatantą, ląstelių granules vėl sutirpinkite šviežioje terpėje ir perpilkite suspensiją į naujas kolbas. Įmaišykite G418 į mitybinę terpę, kad galutinė koncentracija būtų 0,5 mg/ml
Sėjos tankis
2–4 x 104 ląstelės/cm2
Skysčių atnaujinimas
2-3 kartus per savaitę
Atšildymas ir auginimas
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Kokybės kontrolė ir kriokonservavimas

Sterilumas

Mikoplazmos užterštumas atmetamas taikant PGR pagrįstus tyrimus ir liuminescencinius mikoplazmos aptikimo metodus.

Siekiant užtikrinti, kad nebūtų užteršimo bakterijomis, grybeliais ar mielėmis, ląstelių kultūros kasdien vizualiai tikrinamos.

Šaldymo terpė
Kaip kriokonservavimo terpę naudojame visišką augimo terpę (įskaitant FBS) + 10 % DMSO, kad būtų užtikrintas tinkamas gyvybingumas po atšildymo, arba CM-1 (Cytion katalogo numeris 800100), kurioje yra optimizuotų osmoprotektorių ir medžiagų apykaitos stabilizatorių, kad būtų pagerintas atsigavimas ir sumažintas kriokonservavimo sukeltas stresas.
Laikymo sąlygos

Norėdami ilgai saugoti, įdėkite buteliukus į garų fazės skystą azotą maždaug -150-196 °C temperatūroje. Laikymas -80 °C temperatūroje yra priimtinas tik kaip trumpas tarpinis etapas prieš perkeliant į skystąjį azotą.

Pristatymo sąlygos

Kriokonservuotos ląstelių linijos gabenamos ant sauso ledo patvirtintoje, izoliuotoje pakuotėje su pakankamu kiekiu šaldymo skysčio, kad pervežimo metu būtų palaikoma maždaug -78 °C temperatūra. Gavę pakuotę, nedelsdami ją apžiūrėkite ir nedelsdami perkelkite mėgintuvėlius į tinkamą saugyklą.

08Donoras

Veislė / porūšis
OsborneMendel