Gå til innholdet
NRK-EGFP-H2B
Vev
Nyre
Synonymer
NRK EGFP-H2B

Dokumenter

NRK-EGFP-H2B

Cell line · Produktnummer 500724

NRK-EGFP-H2B-cellelinjen er en genetisk modifisert variant av normale rottenyreceller (NRK) som stabilt uttrykker det forsterkede grønne fluorescerende proteinet (...

€800.00ekskl. mva. og frakt
Lages på bestilling
1

01Generell informasjon

Beskrivelse

NRK-EGFP-H2B-cellelinjen er en genetisk modifisert variant av normale rottenyreceller (NRK-celler) som stabilt uttrykker det forsterkede grønne fluorescerende proteinet (EGFP) som er fusjonert med histon H2B. Denne modifikasjonen muliggjør sanntidsvisualisering av kromatin og kjernedynamikk, noe som gjør denne cellelinjen til et uvurderlig verktøy for studier av cellesyklusprogresjon, mitose og kromatinorganisering. Det stabile uttrykket av EGFP-H2B gir et sterkt og konsistent fluorescerende signal, noe som muliggjør høyoppløselig avbildning av levende celler og gjør det mulig for forskere å overvåke nukleære hendelser med stor presisjon.

NRK-celler, som stammer fra nyrevev fra voksne rotter, er mye brukt i cellebiologi på grunn av deres robuste vekstegenskaper og veldokumenterte fysiologiske atferd. Introduksjonen av EGFP-H2B-fusjonsproteinet i disse cellene endrer ikke veksten eller morfologien deres i vesentlig grad, noe som gir pålitelige og reproduserbare eksperimentelle betingelser. Denne cellelinjen er spesielt nyttig i studier av nyrecellenes biologi, cellulære responser på stress og mekanismer for karsinogenese, på grunn av nyrenes rolle i blodfiltrering og utskillelse av avfallsstoffer. I tillegg kan NRK-EGFP-H2B-cellenes fluorescensegenskaper utnyttes i screening av legemidler for å observere effekten av legemidler på celleproliferasjon og kjernemorfologi i sanntid.

Vev
Nyre
Synonymer
  • NRK EGFP-H2B

02Klassifisering

Organisme
Rotte
Vekstegenskaper
Tilhenger
Biosikkerhetsnivå
1

03Egenskaper

Morfologi
Fibroblastlignende celler med fusiform form

04Identifikatorer

Kildehenvisning
NRK-EGFP-H2B (Cytion katalognummer 500724)
NCBI-skattenummer
10116
Cellosaurus
CVCL_AV92
Innskjærer
Ellenberg-laboratoriet (EMBL)

05Uttrykk og mottakelighet

Reseptorer som uttrykkes
Epidermal vekstfaktor (EGF), multiplikasjonsstimulerende aktivitet (MSA)
Proteinekspresjon
EGFP-H2B: Beliggenhet/Gen: 1..589 / Pcmv, 613..1329 / EGFP, 1387..1764 / H2B, 3001..3795 / KanR/NeoR
Produkter
Epidermal vekstfaktor (EGF), multiplikasjonsstimulerende aktivitet (MSA), CMV-promotor Histon H2B, neomycin, fosfotransferase

06Håndtering og kultur

Næringsmedium
DMEM, m: 4,5 g/L glukose, m: 4 mM L-glutamin, m: 3,7 g/L NaHCO3, m: 1,0 mM natriumpyruvat (Cytion artikkelnummer 820300a)
Inkubasjonsatmosfære

37 °C, 5 %CO2, befuktet atmosfære.

Kosttilskudd
Suppler mediet med 10 % FBS, 0,5 mg/mL G418
Dissosiasjonsmiddel
Accutase
Subkultivering
Kast det gamle mediet, og vask cellene med PBS. Tilsett en nytilberedt 0,025 % trypsin/0,02 % EDTA-løsning oppvarmet til 37 grader Celsius, og vent til cellene løsner, noe som vanligvis tar ca. 5 minutter. Nøytraliser trypsinet ved å tilsette nytt medium, og overfør deretter celleblandingen til et rør og sentrifuger. Etter sentrifugering fjerner du supernatanten, resuspenderer cellepelleten i nytt dyrkingsmedium og overfører suspensjonen til nye kolber. Tilsett G418 i dyrkningsmediet for å oppnå en sluttkonsentrasjon på 0,5 mg/ml
Såtetthet
2 til 4 x 104 celler/cm2
Væskefornyelse
2 til 3 ganger per uke
Tining og dyrking
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Kvalitetskontroll og kryokonservering

Sterilitet

Mykoplasma-kontaminering utelukkes ved hjelp av både PCR-baserte analyser og luminescensbaserte metoder for påvisning av mykoplasma.

For å sikre at det ikke finnes bakterie-, sopp- eller gjærkontaminering, blir cellekulturene inspisert visuelt hver dag.

Frysemedium
Som kryopreserveringsmedium bruker vi komplett vekstmedium (inkludert FBS) + 10 % DMSO for tilstrekkelig levedyktighet etter opptining, eller CM-1 (Cytion-katalognummer 800100), som inneholder optimaliserte osmobeskyttende midler og metabolske stabilisatorer for å øke utvinningen og redusere kryoindusert stress.
Oppbevaringsbetingelser

For langtidsoppbevaring plasseres hetteglassene i flytende nitrogen i dampfase ved ca. -150 til -196 °C. Lagring ved -80 °C er kun akseptabelt som et kort mellomtrinn før overføring til flytende nitrogen.

Fraktvilkår

Kryopreserverte cellelinjer sendes på tørris i validert, isolert emballasje med tilstrekkelig kjølemiddel til å opprettholde en temperatur på ca. -78 °C under hele transporten. Ved mottak skal beholderen inspiseres umiddelbart, og hetteglassene skal straks overføres til egnet lagringsplass.

08Donor

Rase / underart
OsborneMendel