Prejsť na obsah
NRK-EGFP-H2B
Tkanivo
Obličky
Synonymá
NRK EGFP-H2B

Dokumenty

NRK-EGFP-H2B

Cell line · Číslo výrobku 500724

Bunka NRK-EGFP-H2B je geneticky modifikovaná varianta normálnych buniek obličiek potkana (NRK), ktoré stabilne exprimujú proteín so zvýšenou zelenou fluorescenciou (...

€800.00bez DPH a poštovného
Na objednávku
1

01Všeobecné informácie

Popis

Bunková línia NRK-EGFP-H2B je geneticky modifikovaný variant normálnych potkaních obličkových buniek (NRK), ktoré stabilne exprimujú zvýšený zelený fluorescenčný proteín (EGFP) spojený s histónom H2B. Táto modifikácia umožňuje vizualizáciu chromatínu a jadrovej dynamiky v reálnom čase, vďaka čomu je táto bunková línia neoceniteľným nástrojom na štúdium progresie bunkového cyklu, mitózy a organizácie chromatínu. Stabilná expresia EGFP-H2B poskytuje jasný a konzistentný fluorescenčný signál, čo uľahčuje zobrazovanie živých buniek s vysokým rozlíšením a umožňuje výskumníkom veľmi presne sledovať jadrové udalosti.

Bunky NRK, ktoré pochádzajú z obličkového tkaniva dospelého potkana, sa široko používajú v bunkovej biológii vďaka svojim robustným rastovým vlastnostiam a dobre zdokumentovanému fyziologickému správaniu. Zavedenie fúzneho proteínu EGFP-H2B do týchto buniek výrazne nemení ich rast ani morfológiu, čo umožňuje spoľahlivé a reprodukovateľné experimentálne podmienky. Táto bunková línia je obzvlášť užitočná pri štúdiu biológie obličkových buniek, bunkových reakcií na stres a mechanizmov karcinogenézy vzhľadom na úlohu obličiek pri filtrovaní krvi a vylučovaní odpadu. Okrem toho sa fluorescenčné schopnosti buniek NRK-EGFP-H2B dajú využiť pri skríningu liečiv na pozorovanie účinkov liečiv na proliferáciu buniek a jadrovú morfológiu v reálnom čase.

Tkanivo
Obličky
Synonymá
  • NRK EGFP-H2B

02Klasifikácia

Organizmus
Potkan
Rastové vlastnosti
Prívrženec
Úroveň biologickej bezpečnosti
1

03Charakteristiky

Morfológia
Fibroblastom podobné bunky s fusiformným tvarom

04Identifikátory

Citácia
NRK-EGFP-H2B (katalógové číslo Cytion 500724)
Daňové identifikačné číslo NCBI
10116
Cellosaurus
CVCL_AV92
Vkladateľ
Ellenbergova laboratória (EMBL)

05Prejav a náchylnosť

Exprimované receptory
Epidermálny rastový faktor (EGF), aktivita stimulujúca množenie (MSA)
Expresia proteínov
EGFP-H2B: Umiestnenie/gén: 1..589 / Pcmv, 613..1329 / EGFP, 1387..1764 / H2B, 3001..3795 / KanR/NeoR
Produkty
Epidermálny rastový faktor (EGF), aktivita stimulujúca množenie (MSA), CMV Promotor Histón H2B, neomycín, fosfotransferáza

06Manipulácia a kultivácia

Kultivačné médium
DMEM, w: 4,5 g/l glukózy, w: 4 mM L-glutamínu, w: 3,7 g/l NaHCO3, w: 1,0 mM pyruvátu sodného (číslo výrobku Cytion 820300a)
Inkubačná atmosféra

37 °C, 5 %CO2, zvlhčená atmosféra.

Doplnky stravy
Doplňte médium o 10 % FBS, 0,5 mg/ml G418
Disociačné činidlo
Accutase
Rozmnožovanie kultúr
Staré médium zlikvidujte a bunky premyte PBS. Pridajte čerstvo pripravený 0,025 % roztok trypsínu/0,02 % EDTA zahriaty na 37 °C a počkajte, kým sa bunky neoddelia, čo zvyčajne trvá asi 5 minút. Neutralizujte trypsín pridaním čerstvého média, potom zmes buniek preneste do skúmavky a odstreďte. Po odstredení odstráňte supernatant, resuspendujte bunkovú peletu v čerstvom kultivačnom médiu a suspenziou prelejte do nových fliaš. Do kultivačného média pridajte G418, aby ste dosiahli konečnú koncentráciu 0,5 mg/ml
Hustota výsevu
2 až 4 x 104 buniek/cm2
Obnova kvapaliny
2 až 3-krát týždenne
Rozmrazovanie a kultivácia
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Kontrola kvality a kryokonzervácia

Sterilita

Kontaminácia mykoplazmami sa vylučuje pomocou testov založených na PCR a metód detekcie mykoplaziem založených na luminiscencii.

Aby sa zabezpečilo, že nedošlo ku kontaminácii baktériami, hubami alebo kvasinkami, bunkové kultúry sa denne vizuálne kontrolujú.

Mrazové médium
Ako kryokonzervačné médium používame kompletné rastové médium (vrátane FBS) + 10 % DMSO na zabezpečenie primeranej životaschopnosti po rozmrazení alebo CM-1 (katalógové číslo 800100 spoločnosti Cytion), ktoré obsahuje optimalizované osmoprotektanty a metabolické stabilizátory na zlepšenie obnovy a zníženie stresu spôsobeného kryo.
Podmienky skladovania

Na dlhodobé uchovávanie umiestnite injekčné liekovky do kvapalnej fázy dusíka v pare pri teplote približne -150 až -196 °C. Skladovanie pri teplote -80 °C je prijateľné len ako krátky prechodný krok pred presunom do tekutého dusíka.

Dopravné podmienky

Kryokonzervované bunkové línie sa prepravujú na suchom ľade v overených, izolovaných obaloch s dostatočným množstvom chladiva na udržanie teploty približne -78 °C počas celej prepravy. Po prijatí ihneď skontrolujte obal a bezodkladne premiestnite injekčné liekovky do vhodného skladu.

08Darca

Plemeno / poddruh
OsborneMendel