Siirry sisältöön
NRK-EGFP-H2B
Kudos
Munuaiset
Synonyymit
NRK EGFP-H2B

Asiakirjat

NRK-EGFP-H2B

Cell line · Tuotenumero 500724

NRK-EGFP-H2B-solulinja on geneettisesti muunnettu muunnos normaaleista rotan munuaisista (NRK) peräisin olevista soluista, jotka ilmentävät vakaasti tehostettua vihreää fluoresoivaa proteiinia (...

€800.00ilman veroja ja toimituskuluja
Valmistetaan tilauksesta
1

01Yleistä tietoa

Kuvaus

NRK-EGFP-H2B-solulinja on geneettisesti muunnettu muunnos normaaleista rotan munuaissoluista (NRK), jotka ilmentävät pysyvästi tehostettua vihreää fluoresoivaa proteiinia (EGFP), joka on fuusioitu histoni H2B:hen. Tämä modifikaatio mahdollistaa kromatiinin ja ydindynamiikan reaaliaikaisen visualisoinnin, mikä tekee tästä solulinjasta korvaamattoman arvokkaan työkalun solusyklin etenemisen, mitoosin ja kromatiinin organisaation tutkimiseen. EGFP-H2B:n vakaa ilmentyminen tuottaa kirkkaan ja johdonmukaisen fluoresoivan signaalin, mikä helpottaa korkearesoluutioista elävän solun kuvantamista ja antaa tutkijoille mahdollisuuden seurata ydintoimintoja erittäin tarkasti.

NRK-soluja, jotka ovat peräisin aikuisen rotan munuaiskudoksesta, käytetään laajalti solubiologiassa niiden vankkojen kasvuominaisuuksien ja hyvin dokumentoidun fysiologisen käyttäytymisen vuoksi. EGFP-H2B-fuusioproteiinin tuominen näihin soluihin ei muuta merkittävästi niiden kasvua tai morfologiaa, mikä mahdollistaa luotettavat ja toistettavat koeolosuhteet. Tämä solulinja on erityisen hyödyllinen munuaissolujen biologian, solujen stressivasteiden ja karsinogeneesin mekanismien tutkimisessa, koska munuaiset suodattavat verta ja erittävät jätteitä. Lisäksi NRK-EGFP-H2B-solujen fluoresenssiominaisuuksia voidaan hyödyntää lääkeaineiden seulontasovelluksissa, joissa voidaan tarkkailla reaaliaikaisesti lääkeaineiden vaikutuksia solujen proliferaatioon ja ydinmorfologiaan.

Kudos
Munuaiset
Synonyymit
  • NRK EGFP-H2B

02Luokittelu

Organismi
Rotta
Kasvuominaisuudet
Kiinnittynyt
Bioturvallisuustaso
1

03Ominaisuudet

Morfologia
Fibroblastin kaltaiset solut, joilla on fusiforminen muoto

04Tunnisteet

Lähdeviite
NRK-EGFP-H2B (Cytionin luettelonumero 500724)
NCBI-verotunnus
10116
Cellosaurus
CVCL_AV92
Tallettaja
Ellenbergin laboratorio (EMBL)

05Ilmentyminen ja alttius

Ilmentyvät reseptorit
Epiderminen kasvutekijä (EGF), lisääntymistä stimuloiva aktiivisuus (MSA)
Proteiinin ilmentyminen
EGFP-H2B: Sijainti/geeni: 1..589 / Pcmv, 613..1329 / EGFP, 1387..1764 / H2B, 3001..3795 / KanR/NeoR
Tuotteet
Epiderminen kasvutekijä (EGF), lisääntymistä stimuloiva aktiivisuus (MSA), CMV Promotor Histoni H2B, Neomysiini, fosfotransferaasi, fosfotransferaasi

06Käsittely ja viljely

Viljelyalusta
DMEM, w: 4,5 g/l glukoosia, w: 4 mM L-glutamiinia, w: 3,7 g/l NaHCO3, w: 1,0 mM natriumpyruvaattia (Cytionin artikkelinumero 820300a)
Inkubaatioilma

37 °C, 5 %CO2, kostutettu ilmakehä.

Ravintolisät
Täydennetään elatusainetta 10 % FBS:llä, 0,5 mg/ml G418:lla
Dissosiaatioreagenssi
Accutase
Soluviljely
Hävitä vanha väliaine ja pese solut PBS:llä. Lisätään tuore 0,025-prosenttinen trypsiini/0,02-prosenttinen EDTA-liuos, joka on lämmitetty 37 celsiusasteeseen, ja odotetaan, kunnes solut irtoavat, mikä kestää yleensä noin 5 minuuttia. Neutraloi trypsiini lisäämällä tuoretta elatusainetta, siirrä soluseos putkeen ja sentrifugoi. Sentrifugoinnin jälkeen poista supernatantti, suspendoi solupelletti uudelleen tuoreessa kasvatusmediassa ja siirrä suspensio uusiin pulloihin. Lisää G418:a elatusaineeseen, jotta saavutetaan 0,5 mg/ml:n lopullinen pitoisuus
Kylvötiheys
2–4 x 104 solua/cm2
Nesteen uusiminen
2-3 kertaa viikossa
Sulatus ja viljely
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Laadunvalvonta ja kryosäilytys

Hedelmättömyys

Mykoplasmakontaminaatio suljetaan pois sekä PCR-pohjaisilla määrityksillä että luminesenssiin perustuvilla mykoplasman osoitusmenetelmillä.

Bakteeri-, sieni- tai hiivakontaminaation välttämiseksi soluviljelmät tarkastetaan päivittäin silmämääräisesti.

Jäädytysaine
Kryosäilytysmediana käytämme täydellistä kasvualustaa (mukaan lukien FBS) + 10 % DMSO:ta riittävän sulatuksen jälkeisen elinkelpoisuuden varmistamiseksi tai CM-1:tä (Cytionin luettelonumero 800100), joka sisältää optimoituja osmoprotectantteja ja metabolisia stabilisaattoreita, jotka parantavat elpymistä ja vähentävät kryosäilytyksen aiheuttamaa stressiä.
Säilytysolosuhteet

Pitkäaikaissäilytystä varten injektiopullot asetetaan höyryfaasissa olevaan nestemäiseen typpeen noin -150 - -196 °C:een. Säilytys -80 °C:ssa on hyväksyttävää vain lyhyenä välivaiheena ennen siirtoa nestemäiseen typpeen.

Toimitusehdot

Kryosäilytetyt solulinjat kuljetetaan kuivajäässä validoidussa, eristetyssä pakkauksessa, jossa on riittävästi kylmäainetta, jotta lämpötila pysyy noin -78 °C:ssa koko kuljetuksen ajan. Pakkaus on tarkastettava välittömästi sen vastaanottamisen jälkeen ja injektiopullot on siirrettävä viipymättä asianmukaiseen varastoon.

08Lahjoittaja

Rotua / alalajia
OsborneMendel