Gå direkt till innehållet
NRK-EGFP-H2B
Vävnad
Njurar
Synonymer
NRK EGFP-H2B

NRK-EGFP-H2B

Cell line · Produktnummer 500724

Cellinjen NRK-EGFP-H2B är en genetiskt modifierad variant av normala råttnjurceller (NRK) som stabilt uttrycker det förstärkta gröna fluorescerande proteinet (...

€800.00exkl. moms och frakt

Anpassning / Rekommendationer

Tillverkas på beställning
1

01Allmän information

Beskrivning

Cellinjen NRK-EGFP-H2B är en genetiskt modifierad variant av NRK-celler (Normal Rat Kidney) som stabilt uttrycker EGFP (Enhanced Green Fluorescent Protein) fusionerat med histon H2B. Denna modifiering möjliggör visualisering i realtid av kromatin och kärndynamik, vilket gör denna cellinje till ett ovärderligt verktyg för att studera cellcykelprogression, mitos och kromatinorganisation. Det stabila uttrycket av EGFP-H2B ger en ljus och konsekvent fluorescerande signal, vilket underlättar högupplöst avbildning av levande celler och gör det möjligt för forskare att övervaka nukleära händelser med stor precision.

NRK-celler, som härstammar från njurvävnaden hos en vuxen råtta, används ofta inom cellbiologi på grund av sina robusta tillväxtegenskaper och väldokumenterade fysiologiska beteenden. Införandet av fusionsproteinet EGFP-H2B i dessa celler förändrar inte nämnvärt deras tillväxt eller morfologi, vilket möjliggör tillförlitliga och reproducerbara experimentella förhållanden. Denna cellinje är särskilt användbar i studier av njurcellsbiologi, cellulära reaktioner på stress och mekanismer för cancerframkallande, med tanke på njurarnas roll när det gäller att filtrera blod och utsöndra avfall. Dessutom kan fluorescensförmågan hos NRK-EGFP-H2B-celler utnyttjas vid läkemedelsscreening för att observera läkemedelseffekter på cellproliferation och nukleär morfologi i realtid.

Vävnad
Njurar
Synonymer
  • NRK EGFP-H2B

02Klassificering

Organism
Råtta
Tillväxtegenskaper
Följsam
Biosäkerhetsnivå
1

03Egenskaper

Morfologi
Fibroblastliknande celler med fusiform form

04Identifierare

Källa
NRK-EGFP-H2B (Cytion katalognummer 500724)
NCBI-skattenummer
10116
Cellosaurus
CVCL_AV92
Insättare
Ellenberg-laboratoriet (EMBL)

05Uttryck och mottaglighet

Receptorer som uttrycks
Epidermal tillväxtfaktor (EGF), multiplikationsstimulerande aktivitet (MSA)
Proteinexpression
EGFP-H2B: Plats/Gen: 1..589 / Pcmv, 613..1329 / EGFP, 1387..1764 / H2B, 3001..3795 / KanR/NeoR
Produkter
Epidermal tillväxtfaktor (EGF), multiplikationsstimulerande aktivitet (MSA), CMV Promotor Histone H2B, Neomycin, Fosfotransferas

06Hantering och odling

Odlingsmedium
DMEM, w: 4,5 g/L glukos, w: 4 mM L-glutamin, w: 3,7 g/L NaHCO3, w: 1,0 mM natriumpyruvat (Cytion artikelnummer 820300a)
Inkubationsatmosfär

37°C, 5%CO2, befuktad atmosfär.

Kosttillskott
Komplettera mediet med 10% FBS, 0,5 mg/ml G418
Dissociationsmedel
Accutase
Vidareodling
Kassera det gamla mediet och tvätta cellerna med PBS. Tillsätt en nyberedd 0,025% trypsin/0,02% EDTA-lösning som värmts upp till 37 grader Celsius och vänta tills cellerna lossnar, vilket vanligtvis tar cirka 5 minuter. Neutralisera trypsinet genom att tillsätta färskt medium, överför sedan cellblandningen till ett rör och centrifugera. Efter centrifugeringen avlägsnas supernatanten, cellpelleten resuspenderas i färskt odlingsmedium och suspensionen överförs till nya kolvar. Tillsätt G418 i odlingsmediet för att uppnå en slutlig koncentration på 0,5 mg/ml
Såtäthet
2 till 4 x 104 celler/cm2
Vätskeförnyelse
2 till 3 gånger per vecka
Upptining och odling
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Kvalitetskontroll och kryokonservering

Sterilitet

Mykoplasmakontaminering utesluts med hjälp av både PCR-baserade analyser och luminiscensbaserade metoder för mykoplasmadiagnostik.

För att säkerställa att det inte finns någon kontaminering av bakterier, svamp eller jäst utsätts cellkulturerna för dagliga visuella inspektioner.

Frysmedel
Som kryokonserveringsmedium använder vi komplett tillväxtmedium (inklusive FBS) + 10% DMSO för adekvat viabilitet efter upptining, eller CM-1 (Cytion katalognummer 800100), som innehåller optimerade osmoprotektanter och metaboliska stabilisatorer för att förbättra återhämtningen och minska kryoinducerad stress.
Förvaringsförhållanden

För långtidsförvaring, placera flaskorna i flytande kväve i ångfas vid ca -150 till -196 °C. Förvaring vid -80 °C är acceptabelt endast som ett kort mellanliggande steg innan överföring till flytande kväve.

Leveransvillkor

Kryopreserverade cellinjer skickas på torris i validerade, isolerade förpackningar med tillräckligt med kylmedel för att hålla cirka -78 °C under hela transporten. Vid mottagandet ska behållaren omedelbart inspekteras och flaskorna utan dröjsmål överföras till lämplig förvaring.

08Donator

Ras / underart
OsborneMendel