Μετάβαση στο περιεχόμενο
NRK-EGFP-H2B
Ιστός
Νεφρός
Συνώνυμα
NRK EGFP-H2B

Έγγραφα

NRK-EGFP-H2B

Cell line · Αριθμός προϊόντος 500724

Η κυτταρική σειρά NRK-EGFP-H2B είναι μια γενετικά τροποποιημένη παραλλαγή φυσιολογικών νεφρικών κυττάρων αρουραίου (NRK) που εκφράζουν σταθερά την ενισχυμένη πράσινη φθορίζουσα πρωτεΐνη (...

€800.00χωρίς ΦΠΑ και έξοδα αποστολής

Προσαρμογή / Προτάσεις

Κατασκευάζεται κατόπιν παραγγελίας
1

01Γενικές πληροφορίες

Περιγραφή

Η κυτταρική σειρά NRK-EGFP-H2B είναι μια γενετικά τροποποιημένη παραλλαγή των φυσιολογικών νεφρικών κυττάρων αρουραίου (NRK) που εκφράζουν σταθερά την ενισχυμένη πράσινη φθορίζουσα πρωτεΐνη (EGFP) συνδεδεμένη με την ιστόνη H2B. Αυτή η τροποποίηση επιτρέπει την οπτικοποίηση σε πραγματικό χρόνο της χρωματίνης και της πυρηνικής δυναμικής, καθιστώντας αυτή την κυτταρική σειρά ένα ανεκτίμητο εργαλείο για τη μελέτη της εξέλιξης του κυτταρικού κύκλου, της μίτωσης και της οργάνωσης της χρωματίνης. Η σταθερή έκφραση του EGFP-H2B παρέχει ένα φωτεινό και σταθερό φθορίζον σήμα, διευκολύνοντας την απεικόνιση ζωντανών κυττάρων υψηλής ανάλυσης και επιτρέποντας στους ερευνητές να παρακολουθούν τα πυρηνικά συμβάντα με μεγάλη ακρίβεια.

Τα κύτταρα NRK, που προέρχονται από τον νεφρικό ιστό ενός ενήλικου αρουραίου, χρησιμοποιούνται ευρέως στην κυτταρική βιολογία λόγω των ισχυρών χαρακτηριστικών ανάπτυξης και των καλά τεκμηριωμένων φυσιολογικών συμπεριφορών τους. Η εισαγωγή της πρωτεΐνης σύντηξης EGFP-H2B σε αυτά τα κύτταρα δεν μεταβάλλει σημαντικά την ανάπτυξη ή τη μορφολογία τους, επιτρέποντας αξιόπιστες και αναπαραγώγιμες πειραματικές συνθήκες. Αυτή η κυτταρική σειρά είναι ιδιαίτερα χρήσιμη σε μελέτες της βιολογίας των νεφρικών κυττάρων, των κυτταρικών αποκρίσεων στο στρες και των μηχανισμών καρκινογένεσης, δεδομένου του ρόλου του νεφρού στο φιλτράρισμα του αίματος και την αποβολή των αποβλήτων. Επιπλέον, οι δυνατότητες φθορισμού των κυττάρων NRK-EGFP-H2B μπορούν να αξιοποιηθούν σε εφαρμογές διαλογής φαρμάκων για την παρατήρηση των επιδράσεων των φαρμάκων στον κυτταρικό πολλαπλασιασμό και τη μορφολογία του πυρήνα σε πραγματικό χρόνο.

Ιστός
Νεφρός
Συνώνυμα
  • NRK EGFP-H2B

02Ταξινόμηση

Οργανισμός
Αρουραίος
Ιδιότητες ανάπτυξης
Πιστός
Επίπεδο βιοασφάλειας
1

03Χαρακτηριστικά

Μορφολογία
Κύτταρα που μοιάζουν με ινοβλάστες και έχουν φουσκοειδές σχήμα

04Αναγνωριστικά

Παραπομπή
NRK-EGFP-H2B (αριθμός καταλόγου Cytion 500724)
Αριθμός φορολογικού μητρώου NCBI
10116
Κελλοσαύρος
CVCL_AV92
Καταθέτης
Εργαστήριο Ellenberg (EMBL)

05Έκφραση και ευαισθησία

Υποδοχείς που εκφράζονται
Επιδερμικός αυξητικός παράγοντας (EGF), δραστηριότητα διέγερσης του πολλαπλασιασμού (MSA)
Έκφραση πρωτεϊνών
EGFP-H2B: Θέση/γονίδιο: 1..589 / Pcmv, 613..1329 / EGFP, 1387..1764 / H2B, 3001..3795 / KanR/NeoR
Προϊόντα
Επιδερμικός αυξητικός παράγοντας (EGF), δραστηριότητα διέγερσης του πολλαπλασιασμού (MSA), CMV Promotor ιστόνη H2B, νεομυκίνη, φωσφοτρανσφεράση

06Χειρισμός και καλλιέργεια

Θρεπτικό μέσο
DMEM, w: 4,5 g/L γλυκόζη, w: 4 mM L-γλουταμίνη, w: 3,7 g/L NaHCO3, w: 1,0 mM πυρουβικό νάτριο (αριθμός άρθρου Cytion 820300a)
Ατμόσφαιρα επώασης

37°C, 5%CO2, υγροποιημένη ατμόσφαιρα.

Συμπληρώματα
Συμπληρώστε το μέσο με 10% FBS, 0,5 mg/mL G418
Αντιδραστήριο αποσύνδεσης
Accutase
Αναπαραγωγή σε υποκαλλιέργεια
Απορρίψτε το παλιό μέσο και πλύνετε τα κύτταρα με PBS. Προσθέστε ένα φρεσκοπαρασκευασμένο διάλυμα θρυψίνης 0,025%/0,02% EDTA θερμαινόμενο στους 37 βαθμούς Κελσίου και περιμένετε μέχρι να αποκολληθούν τα κύτταρα, το οποίο συνήθως διαρκεί περίπου 5 λεπτά. Εξουδετερώστε τη θρυψίνη προσθέτοντας φρέσκο μέσο, στη συνέχεια μεταφέρετε το μείγμα κυττάρων σε ένα σωληνάριο και φυγοκεντρίστε. Μετά τη φυγοκέντρηση, αφαιρέστε το υπερκείμενο υγρό, ανασυσταθείτε το κυτταρικό σφαιρίδιο σε φρέσκο μέσο καλλιέργειας και μεταφέρετε το εναιώρημα σε νέες φιάλες. Ενσωματώστε το G418 στο μέσο καλλιέργειας ώστε να επιτευχθεί τελική συγκέντρωση 0,5 mg/ml
Πυκνότητα σποράς
2 έως 4 x 104 κύτταρα/cm2
Ανανέωση υγρών
2 έως 3 φορές την εβδομάδα
Απόψυξη και καλλιέργεια
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Έλεγχος ποιότητας και κρυοσυντήρηση

Στειρότητα

Η μόλυνση από μυκόπλασμα αποκλείεται με τη χρήση τόσο των δοκιμασιών που βασίζονται στην PCR όσο και των μεθόδων ανίχνευσης μυκοπλάσματος με βάση τη φωταύγεια.

Για να διασφαλιστεί ότι δεν υπάρχει μόλυνση από βακτήρια, μύκητες ή ζύμες, οι κυτταροκαλλιέργειες υποβάλλονται σε καθημερινές οπτικές επιθεωρήσεις.

Μέσο κατάψυξης
Ως μέσο κρυοσυντήρησης, χρησιμοποιούμε πλήρες μέσο ανάπτυξης (συμπεριλαμβανομένου του FBS) + 10% DMSO για επαρκή βιωσιμότητα μετά την απόψυξη, ή CM-1 (αριθμός καταλόγου Cytion 800100), το οποίο περιλαμβάνει βελτιστοποιημένα ωσμοπροστατευτικά και μεταβολικούς σταθεροποιητές για την ενίσχυση της ανάκαμψης και τη μείωση του στρες που προκαλείται από την κρυοσυντήρηση.
Συνθήκες αποθήκευσης

Για μακροχρόνια συντήρηση, τοποθετήστε τα φιαλίδια σε υγρό άζωτο σε φάση ατμών σε θερμοκρασία περίπου -150 έως -196 °C. Η αποθήκευση στους -80 °C είναι αποδεκτή μόνο ως σύντομο ενδιάμεσο βήμα πριν από τη μεταφορά σε υγρό άζωτο.

Όροι αποστολής

Οι κρυοσυντηρημένες κυτταρικές σειρές αποστέλλονται σε ξηρό πάγο σε επικυρωμένη, μονωμένη συσκευασία με επαρκές ψυκτικό μέσο για τη διατήρηση περίπου των -78 °C καθ' όλη τη διάρκεια της μεταφοράς. Κατά την παραλαβή, επιθεωρήστε αμέσως τον περιέκτη και μεταφέρετε τα φιαλίδια χωρίς καθυστέρηση στην κατάλληλη αποθήκη.

08Δωρητής

Φυλή / υποείδος
OsborneMendel