Preskoči na vsebino
NRK-EGFP-H2B
Tkivo
Ledvice
Sinonimi
NRK EGFP-H2B

Dokumenti

NRK-EGFP-H2B

Cell line · Številka izdelka 500724

Celična linija NRK-EGFP-H2B je gensko spremenjena različica normalnih celic ledvic podgane (NRK), ki stabilno izražajo ojačeni zeleni fluorescenčni protein (...

€800.00brez davka in stroškov poštnine
Po naročilu
1

01Splošne informacije

Opis

Celična linija NRK-EGFP-H2B je genetsko spremenjena različica normalnih ledvičnih celic podgane (NRK), ki stabilno izražajo izboljšan zeleni fluorescenčni protein (EGFP), združen s histonom H2B. Ta modifikacija omogoča vizualizacijo kromatina in jedrne dinamike v realnem času, zato je ta celična linija neprecenljivo orodje za preučevanje napredovanja celičnega cikla, mitoze in organizacije kromatina. Stabilno izražanje EGFP-H2B zagotavlja svetel in konsistenten fluorescenčni signal, kar omogoča slikanje celic v živo z visoko ločljivostjo in raziskovalcem omogoča zelo natančno spremljanje jedrskih dogodkov.

Celice NRK, ki izvirajo iz ledvičnega tkiva odrasle podgane, se pogosto uporabljajo v celični biologiji zaradi svojih robustnih značilnosti rasti in dobro dokumentiranega fiziološkega obnašanja. Vnos fuzijskega proteina EGFP-H2B v te celice bistveno ne spremeni njihove rasti ali morfologije, kar omogoča zanesljive in ponovljive eksperimentalne pogoje. Ta celična linija je zaradi vloge ledvic pri filtriranju krvi in izločanju odpadkov še posebej uporabna pri študijah biologije ledvičnih celic, celičnih odzivov na stres in mehanizmov kancerogeneze. Poleg tega se lahko fluorescenčne sposobnosti celic NRK-EGFP-H2B izkoristijo v aplikacijah za presejanje zdravil za opazovanje učinkov zdravil na proliferacijo celic in jedrno morfologijo v realnem času.

Tkivo
Ledvice
Sinonimi
  • NRK EGFP-H2B

02Razvrstitev

Organizem
Podgana
Lastnosti rasti
Pripadnik
Stopnja biološke varnosti
1

03Značilnosti

Morfologija
Fibroblastom podobne celice s fusiformno obliko

04Identifikatorji

Navajanje vira
NRK-EGFP-H2B (kataloška številka Cytion 500724)
Davčna identifikacijska številka NCBI
10116
Cellosaurus
CVCL_AV92
Vlagatelj
Laboratorij Ellenberg (EMBL)

05Izražanje in dovzetnost

Izraženi receptorji
Epidermalni rastni dejavnik (EGF), aktivnost, ki spodbuja razmnoževanje (MSA)
Ekspresija beljakovin
EGFP-H2B: Lokacija/gen: 1..589 / Pcmv, 613..1329 / EGFP, 1387..1764 / H2B, 3001..3795 / KanR/NeoR
Izdelki
Epidermalni rastni dejavnik (EGF), aktivnost, ki spodbuja razmnoževanje (MSA), CMV Promotor Histon H2B, neomicin, fosfotransferaza

06Ravnanje in gojenje

Gojišče
DMEM, w: 4,5 g/L glukoze, w: 4 mM L-glutamina, w: 3,7 g/L NaHCO3, w: 1,0 mM natrijevega piruvata (številka izdelka Cytion 820300a)
Inkubacijska atmosfera

37 °C, 5 %CO2, vlažno ozračje.

Prehranska dopolnila
Gojišču dodajte 10 % FBS, 0,5 mg/ml G418
Reagenca za disociacijo
Accutase
Preusmeritev v drugo kulturo
Zavrzite staro gojišče in celice sperite s PBS. Dodajte sveže pripravljeno 0,025 % raztopino tripsina/0,02 % EDTA, segreto na 37 stopinj Celzija, in počakajte, da se celice ločijo, kar običajno traja približno 5 minut. Tripsin nevtralizirajte z dodajanjem svežega gojišča, nato celično mešanico prenesite v epruveto in centrifugirajte. Po centrifugiranju odstranite supernatant, ponovno suspendirajte celično peleto v svežem gojišču in suspenzijo prenesite v nove bučke. G418 dodajte v gojišče, da dosežete končno koncentracijo 0,5 mg/ml
Gostota setve
2 do 4 x 104 celic/cm2
Obnova tekočine
2 do 3-krat na teden
Odtaljevanje in gojenje
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Kontrola kakovosti in krioprezervacija

Sterilnost

Kontaminacija z mikoplazmo se izključi z uporabo testov na podlagi PCR in metod za odkrivanje mikoplazme na podlagi luminiscence.

Da se zagotovi, da ni kontaminacije z bakterijami, glivami ali kvasovkami, se celične kulture dnevno vizualno pregledujejo.

Medij za zamrzovanje
Kot gojišče za kriokonzervacijo uporabljamo popolno rastno gojišče (vključno s FBS) + 10 % DMSO za ustrezno vitalnost po odmrznitvi ali CM-1 (kataloška številka 800100 podjetja Cytion), ki vključuje optimizirane osmoprotektante in presnovne stabilizatorje za izboljšanje okrevanja in zmanjšanje stresa, povzročenega s kriom.
Pogoji shranjevanja

Za dolgotrajno shranjevanje viale postavite v tekoči dušik v parni fazi pri približno -150 do -196 °C. Shranjevanje pri -80 °C je sprejemljivo le kot kratek vmesni korak pred prenosom v tekoči dušik.

Pogoji dostave

Kriokonzervirane celične linije se pošiljajo na suhem ledu v potrjeni, izolirani embalaži z zadostno količino hladilnega sredstva, da se med prevozom vzdržuje približno -78 °C. Ob prejemu takoj preglejte embalažo in viale nemudoma prenesite v ustrezno skladišče.

08Donator

Pasma / podvrsta
OsborneMendel