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NRK-EGFP-H2B
Gewebe
Niere
Synonyme
NRK EGFP-H2B

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NRK-EGFP-H2B

Cell line · Artikelnummer 500724

Die NRK-EGFP-H2B-Zelllinie ist eine genetisch veränderte Variante normaler Rattennierenzellen (NRK), die das Enhanced Green Fluorescent Protein (EGFP) stabil exprimieren (...

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1

01Allgemeine Informationen

Beschreibung

Die NRK-EGFP-H2B-Zelllinie ist eine genetisch veränderte Variante normaler Rattennierenzellen (NRK), die das mit Histon H2B fusionierte grün fluoreszierende Protein (EGFP) stabil exprimieren. Diese Modifikation ermöglicht die Echtzeit-Visualisierung von Chromatin und Kerndynamik und macht diese Zelllinie zu einem unschätzbaren Werkzeug für die Untersuchung der Zellzyklusprogression, der Mitose und der Chromatinorganisation. Die stabile Expression von EGFP-H2B liefert ein helles und konsistentes Fluoreszenzsignal, das die hochauflösende Bildgebung in lebenden Zellen erleichtert und es den Forschern ermöglicht, nukleare Ereignisse mit großer Präzision zu verfolgen.

NRK-Zellen, die aus dem Nierengewebe erwachsener Ratten stammen, werden aufgrund ihrer robusten Wachstumseigenschaften und ihres gut dokumentierten physiologischen Verhaltens häufig in der Zellbiologie eingesetzt. Die Einführung des EGFP-H2B-Fusionsproteins in diese Zellen verändert ihr Wachstum oder ihre Morphologie nicht wesentlich, so dass zuverlässige und reproduzierbare Versuchsbedingungen möglich sind. Angesichts der Rolle der Niere bei der Blutfilterung und der Ausscheidung von Abfallstoffen ist diese Zelllinie besonders nützlich für die Untersuchung der Nierenzellbiologie, der zellulären Reaktionen auf Stress und der Mechanismen der Karzinogenese. Darüber hinaus können die Fluoreszenzfähigkeiten von NRK-EGFP-H2B-Zellen beim Wirkstoffscreening genutzt werden, um die Auswirkungen von Medikamenten auf die Zellproliferation und die Kernmorphologie in Echtzeit zu beobachten.

Gewebe
Niere
Synonyme
  • NRK EGFP-H2B

02Klassifizierung

Organismus
Ratte
Wachstumseigenschaften
Anhänger
Biologische Sicherheitsstufe
1

03Merkmale

Morphologie
Fibroblastenähnliche Zellen mit fusiformer Form

04Bezeichner

Quellenangabe
NRK-EGFP-H2B (Cytion-Katalognummer 500724)
NCBI-Steuer-ID
10116
Cellosaurus
CVCL_AV92
Einleger
Das Ellenberg-Labor (EMBL)

05Expression und Anfälligkeit

Exprimierte Rezeptoren
Epidermaler Wachstumsfaktor (EGF), Multiplikationsstimulierende Aktivität (MSA)
Proteinexpression
EGFP-H2B: Standort/Gen: 1..589 / Pcmv, 613..1329 / EGFP, 1387..1764 / H2B, 3001..3795 / KanR/NeoR
Produkte
Epidermaler Wachstumsfaktor (EGF), Multiplikationsstimulierende Aktivität (MSA), CMV-Promotor Histon H2B, Neomycin, Phosphotransferase

06Handhabung und Kultur

Nährmedium
DMEM, w: 4,5 g/L Glucose, w: 4 mM L-Glutamin, w: 3,7 g/L NaHCO3, w: 1,0 mM Natriumpyruvat (Cytion-Artikelnummer 820300a)
Inkubationsatmosphäre

37°C, 5%CO2, befeuchtete Atmosphäre.

Nahrungsergänzungsmittel
Ergänzen Sie das Medium mit 10% FBS, 0,5 mg/mL G418
Dissoziationsreagenz
Accutase
Subkultivierung
Verwerfen Sie das alte Medium und waschen Sie die Zellen mit PBS. Geben Sie eine frisch zubereitete, auf 37 Grad Celsius erhitzte 0,025%ige Trypsin/0,02%ige EDTA-Lösung hinzu und warten Sie, bis sich die Zellen ablösen, was in der Regel etwa 5 Minuten dauert. Neutralisieren Sie das Trypsin durch Zugabe von frischem Medium, überführen Sie das Zellgemisch in ein Röhrchen und zentrifugieren Sie es. Nach der Zentrifugation den Überstand abnehmen, das Zellpellet in frischem Kulturmedium resuspendieren und die Suspension in neue Kolben überführen. G418 in das Kulturmedium einbringen, um eine Endkonzentration von 0,5 mg/ml zu erreichen
Aussaatdichte
2 bis 4 x 104 Zellen/cm2
Flüssigkeitswechsel
2 bis 3 Mal pro Woche
Auftauen und Kultivierung
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Qualitätskontrolle und Kryokonservierung

Sterilität

Eine Kontamination mit Mykoplasmen wird sowohl durch PCR-basierte Assays als auch durch lumineszenzbasierte Mykoplasmen-Nachweisverfahren ausgeschlossen.

Um sicherzustellen, dass keine Kontamination mit Bakterien, Pilzen oder Hefen vorliegt, werden die Zellkulturen täglich visuell überprüft.

Gefriermedium
Als Kryokonservierungsmedium verwenden wir komplettes Wachstumsmedium (einschließlich FBS) + 10 % DMSO für eine angemessene Lebensfähigkeit nach dem Auftauen oder CM-1 (Cytion Katalognummer 800100), das optimierte Osmoprotektoren und Stoffwechselstabilisatoren enthält, um die Erholung zu verbessern und kryoinduzierten Stress zu reduzieren.
Lagerbedingungen

Zur Langzeitkonservierung werden die Fläschchen in flüssigem Stickstoff bei etwa -150 bis -196 °C gelagert. Eine Lagerung bei -80 °C ist nur als kurzer Zwischenschritt vor der Überführung in flüssigen Stickstoff akzeptabel.

Versandbedingungen

Kryokonservierte Zelllinien werden auf Trockeneis in einer validierten, isolierten Verpackung mit ausreichend Kühlmittel versandt, um während des gesamten Transports eine Temperatur von etwa -78 °C aufrechtzuerhalten. Prüfen Sie den Behälter bei Erhalt sofort und bringen Sie die Fläschchen unverzüglich in ein geeignetes Lager.

08Spender

Rasse / Unterart
OsborneMendel