Skip to content
NRK-EGFP-H2B
Tissue
כליה
Synonyms
NRK EGFP-H2B

Documents

NRK-EGFP-H2B

Cell line · Product number 500724

The NRK-EGFP-H2B cell line is a genetically modified variant of normal rat kidney (NRK) cells that stably express the enhanced green fluorescent protein (...

US$800.00excl. tax and shipping
Made to order
1

01General information

Description

קו התאים NRK-EGFP-H2B הוא גרסה מהונדסת גנטית של תאי כליה רגילים של חולדה (NRK) המבטאים באופן יציב את החלבון הירוק הזוהר המשופר (EGFP) הממוזג להיסטון H2B. שינוי זה מאפשר הדמיה בזמן אמת של כרומטין ודינמיקה גרעינית, מה שהופך קו תאים זה לכלי יקר ערך לחקר התקדמות מחזור התא, מיטוזה וארגון הכרומטין. הביטוי היציב של EGFP-H2B מספק אות פלואורסצנטי בהיר ועקבי, המאפשר הדמיה של תאים חיים ברזולוציה גבוהה ומאפשר לחוקרים לעקוב אחר אירועים גרעיניים בדיוק רב.

תאי NRK, שמקורם ברקמת הכליה של חולדה בוגרת, נמצאים בשימוש נרחב בביולוגיה תאית בשל מאפייני הצמיחה החזקים שלהם והתנהגויותיהם הפיזיולוגיות המתועדות היטב. הכנסת חלבון ה-EGFP-H2B הממוזג לתאים אלה אינה משנה באופן משמעותי את צמיחתם או מורפולוגייתם, מה שמאפשר תנאי ניסוי אמינים וניתנים לשחזור. קו תאים זה שימושי במיוחד במחקרים של ביולוגיה של תאי כליה, תגובות תאיות למתח ומנגנונים של קרצינוגנזה, לאור תפקידה של הכליה בסינון הדם והפרשת פסולת. בנוסף, יכולות הפלואורסצנטיות של תאי NRK-EGFP-H2B ניתנות לניצול ביישומים של סינון תרופות, כדי לצפות בהשפעות התרופות על התרבות התאים והמורפולוגיה הגרעינית בזמן אמת.

Tissue
כליה
Synonyms
  • NRK EGFP-H2B

02Classification

Organism
Rat
Growth properties
Adherent
Biosafety level
1

03Characteristics

Morphology
תאים דמויי פיברובלסטים בעלי צורה פוספורמית

04Identifiers

Citation
NRK-EGFP-H2B (מספר קטלוגי Cytion 500724)
NCBI TaxID
10116
Cellosaurus
CVCL_AV92
Depositor
מעבדת אלנברג (EMBL)

05Expression and susceptibility

Receptors expressed
פקטור גדילה אפידרמלי (EGF), פעילות מגרה שכפול (MSA)
Protein expression
EGFP-H2B: מיקום/גן: 1..589 / Pcmv, 613..1329 / EGFP, 1387..1764 / H2B, 3001..3795 / KanR/NeoR
Products
פקטור גדילה אפידרמלי (EGF), פעילות מגרה שכפול (MSA), CMV Promotor Histone H2B, Neomycin, Phosphotransferase

06Handling and culture

Culture medium
DMEM, w: 4.5 g/L גלוקוז, w: 4 mM L-גלוטמין, w: 3.7 g/L NaHCO3, w: 1.0 mM נתרן פירובט (מספר קטלוגי Cytion 820300a)
Incubation atmosphere

37°C, 5%CO2, אווירה לחה.

Supplements
הוסף לתמיסה 10% FBS, 0.5 מ"ג/מ"ל G418
Dissociation reagent
אקוטאז
Subculturing
יש להשליך את המדיום הישן ולשטוף את התאים ב-PBS. יש להוסיף תמיסת טריפסין 0.025%/EDTA 0.02% שהוכנה זה עתה, מחוממת ל-37 מעלות צלזיוס, ולהמתין עד שהתאים יתנתקו, מה שלרוב אורך כ-5 דקות. נטרל את הטריפסין על ידי הוספת מדיום טרי, ואז העבר את תערובת התאים לצינור וצנטריפוגה. לאחר הצנטריפוגה, הסר את הנוזל העליון, השעה מחדש את משקע התאים במדיום תרבית טרי, והעבר את התרחיף לבקבוקים חדשים. שלב G418 במדיום התרבית כדי להשיג ריכוז סופי של 0.5 מ"ג/מ"ל
Seeding density
2 עד 4 x 104 תאים/סמ"ר
Fluid renewal
2 עד 3 פעמים בשבוע
Thawing and culturing
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Quality control and cryopreservation

Sterility

זיהום במיקופלסמה נשלל באמצעות בדיקות מבוססות PCR ושיטות זיהוי מיקופלסמה מבוססות לומניסצנציה.

כדי להבטיח שאין זיהום חיידקי, פטרייתי או שמרי, תרבויות התאים עוברות בדיקות ויזואליות יומיות.

Freeze medium
כמדיום לשימור בקירור, אנו משתמשים במדיום גידול מלא (כולל FBS) + 10% DMSO כדי להבטיח חיוניות נאותה לאחר ההפשרה, או CM-1 (מספר קטלוגי Cytion 800100), הכולל חומרים אוסמו-מגנים ומייצבי מטבוליזם משופרים כדי לשפר את ההתאוששות ולהפחית את הלחץ הנגרם מהקפאה.
Storage conditions

לשימור לטווח ארוך, יש להניח את הבקבוקונים בחנקן נוזלי במצב של אדי בטמפרטורה של כ-150 עד 196 מעלות צלזיוס. אחסון בטמפרטורה של 80 מעלות צלזיוס מקובל רק כצעד ביניים קצר לפני העברה לחנקן נוזלי.

Shipping conditions

שורות תאים שהוקפאו נשלחות בקרח יבש באריזה מאושרת ומבודדת עם כמות מספקת של חומר קירור כדי לשמור על טמפרטורה של כ-78°C- במהלך ההובלה. עם קבלת המשלוח, יש לבדוק את המכל מיד ולהעביר את הבקבוקונים ללא דיחוי לאחסון מתאים.

08Donor

Breed / subspecies
אוסבורן מנדל