الانتقال إلى المحتوى
NRK-EGFP-H2B
الأنسجة
الكلى
المرادفات
NRK EGFP-H2B

المستندات

NRK-EGFP-H2B

Cell line · رقم المنتج 500724

يُعد خط الخلايا NRK-EGFP-H2B نسخة معدلة وراثياً من خلايا الكلى الطبيعية للجرذان (NRK) التي تعبر بشكل مستقر عن البروتين الأخضر الفلوري المعزز (...

€800.00باستثناء الضريبة وتكاليف الشحن
حسب الطلب
1

01معلومات عامة

الوصف

إن خط الخلايا NRK-EGFP-H2B هو نوع معدّل وراثياً من خلايا كلية الفئران الطبيعية (NRK) التي تعبر بثبات عن البروتين الفلوري الأخضر المحسّن (EGFP) المدمج مع الهيستون H2B. يسمح هذا التعديل بالتصور في الوقت الحقيقي للكروماتين والديناميكيات النووية، مما يجعل هذا الخط الخلوي أداة لا تقدر بثمن لدراسة تطور دورة الخلية، والانقسام الفتيلي، وتنظيم الكروماتين. ويوفر التعبير المستقر ل EGFP-H2B إشارة فلورية ساطعة ومتسقة مما يسهل التصوير عالي الدقة للخلية الحية ويمكّن الباحثين من مراقبة الأحداث النووية بدقة كبيرة.

تُستخدم خلايا NRK، التي تنشأ من أنسجة الكلى لدى الفئران البالغة، على نطاق واسع في البيولوجيا الخلوية نظراً لخصائص نموها القوية وسلوكياتها الفسيولوجية الموثقة جيداً. لا يؤدي إدخال بروتين الاندماج EGFP-H2B في هذه الخلايا إلى تغيير كبير في نموها أو مورفولوجيتها، مما يسمح بظروف تجريبية موثوقة وقابلة للتكرار. هذا الخط الخلوي مفيد بشكل خاص في دراسات بيولوجيا خلايا الكلى، والاستجابات الخلوية للإجهاد، وآليات التسرطن، نظراً لدور الكلية في تصفية الدم وإخراج الفضلات. وبالإضافة إلى ذلك، يمكن تسخير قدرات التألق لخلايا NRK-EGFP-H2B في تطبيقات فحص الأدوية لمراقبة تأثيرات الأدوية على تكاثر الخلايا والتشكل النووي في الوقت الحقيقي.

الأنسجة
الكلى
المرادفات
  • NRK EGFP-H2B

02التصنيف

كائن حي
الجرذ
خصائص النمو
الملتزم
مستوى السلامة البيولوجية
1

03الخصائص

المورفولوجيا
خلايا تشبه الخلايا الليفية ذات الشكل المغزلي

04المعرّفات

المرجع
NRK-EGFP-H2B (كتالوج سيتيون رقم 500724)
رقم التعريف الضريبي لدى NCBI
10116
سيلوصور
CVCL_AV92
المودع
مختبر إلينبرغ (EMBL)

05التعبير والقابلية للإصابة

المستقبلات المُعبَّر عنها
عامل نمو البشرة (EGF)، النشاط المحفز للتكاثر (MSA)
التعبير البروتيني
EGFP-H2B: الموقع/الجين: 1...589 / Pcmv، 613...1329 / EGFP، 1387...1764 / H2B، 3001...3795 / KanR/NeoR
المنتجات
عامل نمو البشرة (EGF)، نشاط محفز التكاثر (MSA)، هيستون H2B المروج للفيروسات المتنقلة CMV، نيومايسين، فوسفوترانسفيراز

06التعامل مع النباتات وزراعتها

وسط الاستزراع
DMEM، ث: 4.5 جم/لتر جلوكوز، ث: 4 مليمتر جلوتامين، ث: 3.7 جم/لتر NaHCO3، ث: 1.0 مليمتر بيروفات الصوديوم (رقم المادة 820300a من سايتيون)
بيئة الحضانة

37 درجة مئوية، و5% من ثاني أكسيد الكربون في جو مرطب.

المكملات الغذائية
أضف إلى الوسط 10٪ FBS، 0.5 ملغم/مل G418
كاشف التفكك
أكوتاس
إعادة الاستنبات
تخلص من الوسط القديم واغسل الخلايا بمحلول PBS. أضف محلول التربسين المحضر حديثاً بنسبة 0.025% تريبسين/0.02% EDTA المُحضّر حديثاً والمسخن إلى 37 درجة مئوية وانتظر حتى تنفصل الخلايا، وهو ما يستغرق عادةً حوالي 5 دقائق. قم بتحييد التربسين عن طريق إضافة وسط طازج، ثم انقل خليط الخلايا إلى أنبوب وأجهزة الطرد المركزي. بعد الطرد المركزي، قم بإزالة المادة الطافية، وأعد تعليق كريات الخلية في وسط مستنبت جديد، وانقل المعلق إلى قوارير جديدة. ادمج G418 في وسط المستنبت للحصول على تركيز نهائي قدره 0.5 مجم/مل
كثافة البذر
2 إلى 4 × 104 خلية/سم2
تجديد السوائل
2 إلى 3 مرات في الأسبوع
إذابة الثلج والزراعة
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07مراقبة الجودة والحفظ بالتبريد

العقم

يُستبعد التلوث بالميكوبلازما باستخدام كل من المقايسات القائمة على تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR) وطرق الكشف عن الميكوبلازما القائمة على التألق.

ولضمان عدم وجود تلوث بكتيري أو فطري أو خميرة يتم إخضاع مزارع الخلايا للفحص البصري اليومي.

وسط التجميد
كوسيط للحفظ بالتبريد، نستخدم وسط نمو كامل (بما في ذلك FBS) + 10% DMSO من أجل الحفاظ على حيوية كافية بعد ذوبان الجليد أو CM-1 (كتالوج Cytion رقم 800100)، والذي يتضمن مواد حماية أسموزموبيروتيكتية ومثبتات أيضية مُحسّنة لتعزيز التعافي وتقليل الإجهاد الناجم عن التبريد.
شروط التخزين

للحفظ طويل الأمد، ضع القوارير في نيتروجين سائل في طور البخار عند درجة حرارة تتراوح بين -150 و -196 درجة مئوية تقريباً. يُقبل التخزين عند درجة حرارة -80 درجة مئوية فقط كخطوة مؤقتة قصيرة قبل النقل إلى النيتروجين السائل.

شروط الشحن

تُشحن خطوط الخلايا المحفوظة بالتبريد على ثلج جاف في عبوات معزولة وموثوقة مع مبرد كافٍ للحفاظ على درجة حرارة -78 درجة مئوية تقريبًا طوال فترة النقل. عند الاستلام، افحص الحاوية على الفور وانقل القوارير دون تأخير إلى المخزن المناسب.

08المانح

السلالة / النوع الفرعي
أوزبورن مندل