İçeriğe atla
NRK-EGFP-H2B
Doku
Böbrek
Eş anlamlılar
NRK EGFP-H2B

NRK-EGFP-H2B

Cell line · Ürün numarası 500724

NRK-EGFP-H2B hücre hattı, normal sıçan böbrek (NRK) hücrelerinin, güçlendirilmiş yeşil floresan proteinini istikrarlı bir şekilde eksprese eden genetik olarak değiştirilmiş bir varyantıdır (...

€800.00vergi ve kargo hariç
Sipariş üzerine üretilir
1

01Genel bilgiler

Açıklama

NRK-EGFP-H2B hücre hattı, histon H2B'ye kaynaşmış gelişmiş yeşil floresan proteini (EGFP) kararlı bir şekilde ifade eden normal sıçan böbrek (NRK) hücrelerinin genetik olarak değiştirilmiş bir çeşididir. Bu modifikasyon, kromatin ve nükleer dinamiklerin gerçek zamanlı görselleştirilmesine olanak tanıyarak bu hücre hattını hücre döngüsü ilerlemesi, mitoz ve kromatin organizasyonunu incelemek için paha biçilmez bir araç haline getirir. EGFP-H2B'nin kararlı ifadesi parlak ve tutarlı bir floresan sinyali sağlayarak yüksek çözünürlüklü canlı hücre görüntülemeyi kolaylaştırır ve araştırmacıların nükleer olayları büyük bir hassasiyetle izlemelerine olanak tanır.

Yetişkin bir sıçanın böbrek dokusundan köken alan NRK hücreleri, sağlam büyüme özellikleri ve iyi belgelenmiş fizyolojik davranışları nedeniyle hücresel biyolojide yaygın olarak kullanılmaktadır. EGFP-H2B füzyon proteininin bu hücrelere eklenmesi, büyümelerini veya morfolojilerini önemli ölçüde değiştirmez, güvenilir ve tekrarlanabilir deneysel koşullara izin verir. Bu hücre hattı, böbreğin kanı filtreleme ve atıkları dışarı atma rolü göz önüne alındığında, böbrek hücresi biyolojisi, strese karşı hücresel tepkiler ve karsinogenez mekanizmaları çalışmalarında özellikle yararlıdır. Ayrıca, NRK-EGFP-H2B hücrelerinin floresan özellikleri, hücre çoğalması ve nükleer morfoloji üzerindeki ilaç etkilerini gerçek zamanlı olarak gözlemlemek için ilaç tarama uygulamalarında kullanılabilir.

Doku
Böbrek
Eş anlamlılar
  • NRK EGFP-H2B

02Sınıflandırma

Canlı
Sıçan
Büyüme özellikleri
Bağlı
Biyogüvenlik seviyesi
1

03Özellikler

Morfoloji
Fusiform şekilli fibroblast benzeri hücreler

04Tanımlayıcılar

Kaynak gösterimi
NRK-EGFP-H2B (Cytion katalog numarası 500724)
NCBI Vergi Kimlik Numarası
10116
Cellosaurus
CVCL_AV92
Mevduat sahibi
Ellenberg Laboratuvarı (EMBL)

05İfade ve duyarlılık

Eksprese edilen reseptörler
Epidermal büyüme faktörü (EGF), çoğalmayı uyarıcı aktivite (MSA)
Protein ekspresyonu
EGFP-H2B: Konum/Gen: 1..589 / Pcmv, 613..1329 / EGFP, 1387..1764 / H2B, 3001..3795 / KanR/NeoR
Ürünler
Epidermal büyüme faktörü (EGF), çoğalmayı uyarıcı aktivite (MSA), CMV Promotor Histon H2B, Neomisin, Fosfotransferaz

06İşleme ve yetiştirme

Besiyeri
DMEM, w: 4,5 g/L Glukoz, w: 4 mM L-Glutamin, w: 3,7 g/L NaHCO3, w: 1,0 mM Sodyum piruvat (Cytion ürün numarası 820300a)
Kuluçka ortamı

37°C, %5CO2, nemlendirilmiş atmosfer.

Takviyeler
Ortamı %10 FBS, 0,5 mg/mL G418 ile takviye edin
Ayrıştırma reaktifi
Accutase
Alt kültür oluşturma
Eski ortamı atın ve hücreleri PBS ile yıkayın. Taze hazırlanmış %0,025 tripsin/%0,02 EDTA çözeltisini 37 santigrat dereceye ısıtarak ekleyin ve hücreler ayrılana kadar bekleyin; bu süre genellikle yaklaşık 5 dakika sürer. Taze besiyeri ekleyerek tripsini nötralize edin, ardından hücre karışımını bir tüpe aktarın ve santrifüjleyin. Santrifüjden sonra süpernatantı çıkarın, hücre peletini taze kültür ortamında yeniden süspanse edin ve süspansiyonu yeni şişelere aktarın. 0,5 mg/ml nihai konsantrasyon elde etmek için kültür ortamına G418 ekleyin
Ekim yoğunluğu
2 ila 4 x 104 hücre/cm2
Sıvı değişimi
haftada 2 ila 3 kez
Çözme ve kültürleme
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Kalite kontrol ve kriyoprezervasyon

Kısırlık

Mikoplazma kontaminasyonu hem PCR tabanlı tahliller hem de lüminesans tabanlı mikoplazma tespit yöntemleri kullanılarak dışlanır.

Bakteriyel, fungal veya maya kontaminasyonu olmadığından emin olmak için hücre kültürleri günlük görsel incelemelere tabi tutulur.

Dondurma ortamı
Kriyoprezervasyon ortamı olarak, yeterli çözülme sonrası canlılık için tam büyüme ortamı (FBS dahil) + %10 DMSO veya iyileşmeyi artırmak ve kriyo-indüklenmiş stresi azaltmak için optimize edilmiş ozmoprotektanlar ve metabolik stabilizatörler içeren CM-1 (Cytion katalog numarası 800100) kullanıyoruz.
Saklama koşulları

Uzun süreli muhafaza için flakonları yaklaşık -150 ila -196 °C'de buhar fazlı sıvı nitrojen içine yerleştirin. 80 °C'de saklama yalnızca sıvı nitrojene aktarılmadan önce kısa bir ara adım olarak kabul edilebilir.

Nakliye koşulları

Kriyoprezerve edilmiş hücre hatları, nakliye boyunca yaklaşık -78 °C'yi korumak için yeterli soğutucu akışkan içeren, onaylanmış, yalıtılmış ambalajlarda kuru buz üzerinde gönderilir. Teslim aldığınızda, kabı hemen inceleyin ve flakonları gecikmeden uygun depoya aktarın.

08Bağışçı

Tür / alt tür
OsborneMendel