Pāriet uz saturu
NRK-EGFP-H2B
Audums
Nieres
Sinonīmi
NRK EGFP-H2B

Dokumenti

NRK-EGFP-H2B

Cell line · Preces numurs 500724

NRK-EGFP-H2B šūnu līnija ir ģenētiski modificēts normālu žurku nieru (NRK) šūnu variants, kas stabili ekspresē pastiprināto zaļo fluorescējošo proteīnu (...

€800.00bez nodokļa un piegādes izmaksām
Pēc pasūtījuma
1

01Vispārīga informācija

Apraksts

NRK-EGFP-H2B šūnu līnija ir ģenētiski modificēts normālu žurku nieru (NRK) šūnu variants, kas stabili ekspresē pastiprinātu zaļo fluorescējošo proteīnu (EGFP), kas sapludināts ar histonu H2B. Šī modifikācija ļauj reāllaikā vizualizēt hromatīna un kodola dinamiku, padarot šo šūnu līniju par nenovērtējamu rīku šūnu cikla norises, mitozes un hromatīna organizācijas izpētei. Stabila EGFP-H2B ekspresija nodrošina spilgtu un konsekventu fluorescējošu signālu, kas atvieglo augstas izšķirtspējas dzīvās šūnas attēlveidošanu un ļauj pētniekiem ļoti precīzi uzraudzīt kodola notikumus.

NRK šūnas, kas iegūtas no pieaugušu žurku nieru audiem, plaši izmanto šūnu bioloģijā, jo tām piemīt stabilas augšanas īpašības un labi dokumentētas fizioloģiskās īpašības. EGFP-H2B saplūšanas proteīna ieviešana šajās šūnās būtiski nemaina to augšanu vai morfoloģiju, kas ļauj nodrošināt uzticamus un reproducējamus eksperimentālos apstākļus. Šī šūnu līnija ir īpaši noderīga pētījumos par nieru šūnu bioloģiju, šūnu reakciju uz stresu un kancerogēzes mehānismiem, ņemot vērā nieru lomu asins filtrēšanā un atkritumu izvadīšanā. Turklāt NRK-EGFP-H2B šūnu fluorescences spējas var izmantot zāļu skrīninga lietojumos, lai reāllaikā novērotu zāļu ietekmi uz šūnu proliferāciju un kodola morfoloģiju.

Audums
Nieres
Sinonīmi
  • NRK EGFP-H2B

02Klasifikācija

Organisms
Žurka
Augšanas īpašības
Atbalstītājs
Bioloģiskās drošības līmenis
1

03Raksturlielumi

Morfoloģija
Fibroblastiem līdzīgas šūnas ar fusiformas formu

04Identifikatori

Atsauce
NRK-EGFP-H2B (Cytion kataloga numurs 500724)
NCBI nodokļu identifikācijas numurs
10116
Cellosaurus
CVCL_AV92
noguldītājs
Ellenberga laboratorija (EMBL)

05Pazīmes un uzņēmība

Ekspresētie receptori
Epidermas augšanas faktors (EGF), multiplikāciju stimulējoša aktivitāte (MSA)
Proteīnu ekspresija
EGFP-H2B: Atrašanās vieta/gēns: 1..589 / Pcmv, 613..1329 / EGFP, 1387..1764 / H2B, 3001..3795 / KanR/NeoR
Produkti
Epidermas augšanas faktors (EGF), multiplikāciju stimulējošā aktivitāte (MSA), CMV Promotors Histons H2B, neomicīns, fosfotransferāze

06Apstrāde un audzēšana

Barotne
DMEM, w: 4,5 g/l glikozes, w: 4 mM L-glutamīna, w: 3,7 g/l NaHCO3, w: 1,0 mM nātrija piruvāta (Cytion izstrādājuma numurs 820300a)
Inkubācijas vide

37°C, 5%CO2, mitrināta atmosfēra.

Papildinājumi
Papildiniet barotni ar 10% FBS, 0,5 mg/ml G418
Disociācijas reaģents
Accutase
Pārstādīšana
Izmetiet veco barotni un izskalojiet šūnas ar PBS. Pievienojiet svaigi sagatavotu 0,025 % tripsīna/0,02 % EDTA šķīdumu, kas uzsildīts līdz 37 °C temperatūrai, un pagaidiet, līdz šūnas atdalās, kas parasti ilgst apmēram 5 minūtes. Neitralizēt tripsīnu, pievienojot svaigu barotni, pēc tam šūnu maisījumu pārvietot mēģenē un centrifugēt. Pēc centrifugēšanas noņemiet supernatantu, atkārtoti suspendējiet šūnu granulas svaigā barotnē un pārnesiet suspensiju uz jaunām kolbām. Iekļaut G418 barotnē, lai sasniegtu galīgo koncentrāciju 0,5 mg/ml
Sēšanas blīvums
2 līdz 4 x 104 šūnas/cm2
Šķidruma atjaunošana
2 līdz 3 reizes nedēļā
Atkausēšana un kultivēšana
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Kvalitātes kontrole un kriokonservācija

Sterilitāte

Mikoplazmas piesārņojums tiek izslēgts, izmantojot gan uz PCR balstītus testus, gan uz luminiscenci balstītas mikoplazmas noteikšanas metodes.

Lai pārliecinātos, ka nav baktēriju, sēnīšu vai rauga piesārņojuma, šūnu kultūras katru dienu vizuāli pārbauda.

Saldēšanas barotne
Kā kriokonservēšanas barotni mēs izmantojam pilnvērtīgu augšanas barotni (ieskaitot FBS) + 10 % DMSO, lai nodrošinātu pietiekamu dzīvotspēju pēc atkausēšanas, vai CM-1 (Cytion kataloga numurs 800100), kas ietver optimizētus osmoprotektorus un metaboliskos stabilizatorus, lai uzlabotu atveseļošanos un samazinātu krioinducēto stresu.
Uzglabāšanas nosacījumi

Ilgstošai uzglabāšanai flakonus ievietojiet šķidrā slāpeklī ar tvaika fāzi aptuveni -150 līdz -196 °C temperatūrā. Uzglabāšana -80 °C temperatūrā ir pieļaujama tikai kā īss starpposms pirms pārvietošanas uz šķidro slāpekli.

Piegādes nosacījumi

Kriokonservētas šūnu līnijas tiek sūtītas uz sausā ledus apstiprinātā, izolētā iepakojumā ar pietiekamu dzesēšanas šķidruma daudzumu, lai visā transportēšanas laikā uzturētu aptuveni -78 °C temperatūru. Pēc saņemšanas nekavējoties pārbaudiet iepakojumu un nekavējoties pārvietojiet flakonus uz atbilstošu uzglabāšanas vietu.

08Ziedotājs

Šķirne / pasuga
OsborneMendel