Skip to content
NRK-EGFP-H2B
Tissue
Thận
Synonyms
NRK EGFP-H2B

Documents

NRK-EGFP-H2B

Cell line · Product number 500724

The NRK-EGFP-H2B cell line is a genetically modified variant of normal rat kidney (NRK) cells that stably express the enhanced green fluorescent protein (...

€800.00excl. tax and shipping

Customization / Recommendations

Made to order
1

01General information

Description

Dòng tế bào NRK-EGFP-H2B là một biến thể được biến đổi gen của tế bào thận chuột bình thường (NRK), có khả năng biểu hiện ổn định protein huỳnh quang xanh lá cây tăng cường (EGFP) được gắn với histone H2B. Sự biến đổi này cho phép quan sát theo thời gian thực các quá trình động học của chromatin và nhân tế bào, khiến dòng tế bào này trở thành công cụ vô giá trong việc nghiên cứu tiến trình chu kỳ tế bào, phân bào và tổ chức chromatin. Sự biểu hiện ổn định của EGFP-H2B cung cấp tín hiệu huỳnh quang sáng và nhất quán, hỗ trợ hình ảnh tế bào sống với độ phân giải cao và cho phép các nhà nghiên cứu theo dõi các sự kiện trong nhân với độ chính xác cao.

Tế bào NRK, được lấy từ mô thận của chuột trưởng thành, được sử dụng rộng rãi trong sinh học tế bào nhờ đặc tính phát triển mạnh mẽ và các hành vi sinh lý được ghi chép kỹ lưỡng. Việc đưa protein liên kết EGFP-H2B vào các tế bào này không làm thay đổi đáng kể sự phát triển hoặc hình thái của chúng, cho phép tạo ra các điều kiện thí nghiệm đáng tin cậy và có thể tái hiện. Dòng tế bào này đặc biệt hữu ích trong các nghiên cứu về sinh học tế bào thận, phản ứng của tế bào với stress và cơ chế gây ung thư, do vai trò của thận trong việc lọc máu và thải độc. Ngoài ra, khả năng phát huỳnh quang của tế bào NRK-EGFP-H2B có thể được tận dụng trong các ứng dụng sàng lọc thuốc để quan sát tác động của thuốc lên sự phát triển của tế bào và hình thái nhân trong thời gian thực.

Tissue
Thận
Synonyms
  • NRK EGFP-H2B

02Classification

Organism
Rat
Growth properties
Adherent
Biosafety level
1

03Characteristics

Morphology
Tế bào giống fibroblast có hình dạng fusiform

04Identifiers

Citation
NRK-EGFP-H2B (Số catalog của Cytion: 500724)
NCBI TaxID
10116
Cellosaurus
CVCL_AV92
Depositor
Phòng thí nghiệm Ellenberg (EMBL)

05Expression and susceptibility

Receptors expressed
Yếu tố tăng trưởng biểu bì (EGF), hoạt tính kích thích nhân lên (MSA)
Protein expression
EGFP-H2B: Vị trí/Gen: 1..589 / Pcmv, 613..1329 / EGFP, 1387..1764 / H2B, 3001..3795 / KanR/NeoR
Products
Yếu tố tăng trưởng biểu bì (EGF), Hoạt tính kích thích nhân lên (MSA), Histone H2B của promoter CMV, Neomycin, Phosphotransferase

06Handling and culture

Culture medium
DMEM, chứa: 4,5 g/L glucose, chứa: 4 mM L-glutamine, chứa: 3,7 g/L NaHCO₃, chứa: 1,0 mM natri pyruvate (số hiệu sản phẩm Cytion 820300a)
Incubation atmosphere

37°C, 5%CO₂, môi trường ẩm.

Supplements
Bổ sung vào môi trường nuôi cấy 10% huyết thanh bò phôi (FBS) và 0,5 mg/mL G418
Dissociation reagent
Accutase
Subculturing
Loại bỏ môi trường cũ và rửa tế bào bằng PBS. Thêm dung dịch trypsin 0,025%/EDTA 0,02% mới pha, đã được làm nóng đến 37 độ Celsius, và chờ cho đến khi tế bào tách ra, thường mất khoảng 5 phút. Trung hòa trypsin bằng cách thêm môi trường tươi, sau đó chuyển hỗn hợp tế bào vào ống và ly tâm. Sau khi ly tâm, loại bỏ dịch trên, tái phân tán cặn tế bào trong môi trường nuôi cấy tươi và chuyển hỗn hợp vào bình mới. Thêm G418 vào môi trường nuôi cấy để đạt nồng độ cuối cùng 0,5 mg/ml
Seeding density
2 đến 4 × 10⁴ tế bào/cm²
Fluid renewal
2 đến 3 lần mỗi tuần
Thawing and culturing
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Quality control and cryopreservation

Sterility

Sự nhiễm khuẩn Mycoplasma được loại trừ bằng cả các phương pháp xét nghiệm dựa trên PCR và các phương pháp phát hiện Mycoplasma dựa trên phát quang.

Để đảm bảo không có nhiễm khuẩn vi khuẩn, nấm hoặc men, các mẫu nuôi cấy tế bào được kiểm tra trực quan hàng ngày.

Freeze medium
Như một môi trường bảo quản đông lạnh, chúng tôi sử dụng môi trường tăng trưởng hoàn chỉnh (bao gồm FBS) + 10% DMSO để đảm bảo độ sống sau khi rã đông, hoặc CM-1 (mã sản phẩm Cytion 800100), bao gồm các chất bảo vệ thẩm thấu và chất ổn định chuyển hóa được tối ưu hóa để cải thiện quá trình phục hồi và giảm stress do đông lạnh gây ra.
Storage conditions

Để bảo quản lâu dài, hãy đặt ống nghiệm vào nitơ lỏng ở pha hơi ở nhiệt độ khoảng −150 đến −196 °C. Việc bảo quản ở −80 °C chỉ được chấp nhận như một bước trung gian ngắn hạn trước khi chuyển sang nitơ lỏng.

Shipping conditions

Các dòng tế bào được bảo quản bằng phương pháp đông lạnh được vận chuyển trên đá khô trong bao bì cách nhiệt đã được kiểm định, kèm theo lượng chất làm lạnh đủ để duy trì nhiệt độ khoảng −78 °C trong suốt quá trình vận chuyển. Khi nhận hàng, hãy kiểm tra ngay lập tức bao bì và chuyển các ống nghiệm sang nơi lưu trữ phù hợp mà không chậm trễ.

08Donor

Breed / subspecies
Osborne Mendel