Přejít na obsah
NRK-EGFP-H2B
Tkáň
Ledviny
Synonyma
NRK EGFP-H2B

Dokumenty

NRK-EGFP-H2B

Cell line · Číslo výrobku 500724

Buněčná linie NRK-EGFP-H2B je geneticky modifikovaná varianta normálních buněk krysí ledviny (NRK), které stabilně exprimují zesílený zelený fluorescenční protein (...

€800.00bez DPH a poštovného
Na zakázku
1

01Obecné informace

Popis

Buněčná linie NRK-EGFP-H2B je geneticky modifikovaná varianta buněk normální ledviny potkana (NRK), která stabilně exprimuje zesílený zelený fluorescenční protein (EGFP) spojený s histonem H2B. Tato modifikace umožňuje vizualizaci chromatinu a jaderné dynamiky v reálném čase, což z této buněčné linie činí neocenitelný nástroj pro studium průběhu buněčného cyklu, mitózy a organizace chromatinu. Stabilní exprese EGFP-H2B poskytuje jasný a konzistentní fluorescenční signál, což usnadňuje zobrazování živých buněk s vysokým rozlišením a umožňuje výzkumníkům sledovat jaderné děje s velkou přesností.

Buňky NRK, pocházející z ledvinové tkáně dospělého potkana, jsou díky svým robustním růstovým vlastnostem a dobře zdokumentovanému fyziologickému chování široce využívány v buněčné biologii. Zavedení fúzního proteinu EGFP-H2B do těchto buněk výrazně nemění jejich růst ani morfologii, což umožňuje spolehlivé a reprodukovatelné experimentální podmínky. Vzhledem k úloze ledvin při filtraci krve a vylučování odpadních látek je tato buněčná linie zvláště užitečná při studiu biologie ledvinových buněk, buněčných reakcí na stres a mechanismů karcinogeneze. Kromě toho lze fluorescenční schopnosti buněk NRK-EGFP-H2B využít při screeningu léčiv a sledovat účinky léčiv na buněčnou proliferaci a jadernou morfologii v reálném čase.

Tkáň
Ledviny
Synonyma
  • NRK EGFP-H2B

02Klasifikace

Organismus
Krysa
Růstové vlastnosti
Přívrženec
Úroveň biologické bezpečnosti
1

03Charakteristika

Morfologie
Fibroblastům podobné buňky s fusiformním tvarem

04Identifikátory

Citace
NRK-EGFP-H2B (katalogové číslo Cytion 500724)
Daňové identifikační číslo NCBI
10116
Cellosaurus
CVCL_AV92
Vkladatel
Ellenbergova laboratoř (EMBL)

05Exprese a náchylnost

Exprimované receptory
Epidermální růstový faktor (EGF), multiplikační stimulační aktivita (MSA)
Exprese proteinů
EGFP-H2B: Umístění/geny: 1..589 / Pcmv, 613..1329 / EGFP, 1387..1764 / H2B, 3001..3795 / KanR/NeoR
Produkty
Epidermální růstový faktor (EGF), aktivita stimulující množení (MSA), CMV Promotor Histon H2B, neomycin, fosfotransferáza

06Manipulace a chov

Pěstovací médium
DMEM, w: 4,5 g/l glukózy, w: 4 mM L-glutaminu, w: 3,7 g/l NaHCO3, w: 1,0 mM pyruvátu sodného (číslo výrobku Cytion 820300a)
Inkubační atmosféra

37 °C, 5 %CO2, zvlhčená atmosféra.

Doplňky stravy
Doplňte médium 10% FBS, 0,5 mg/ml G418
Disociační činidlo
Accutase
Subkultivace
Staré médium zlikvidujte a buňky promyjte PBS. Přidejte čerstvě připravený 0,025% roztok trypsinu/0,02% EDTA zahřátý na 37 °C a počkejte, dokud se buňky neoddělí, což obvykle trvá asi 5 minut. Neutralizujte trypsin přidáním čerstvého média, poté přeneste směs buněk do zkumavky a odstřeďte. Po odstředění odeberte supernatant, resuspendujte buněčnou peletu v čerstvém kultivačním médiu a suspenzi přeneste do nových baněk. Přidejte G418 do kultivačního média, abyste dosáhli konečné koncentrace 0,5 mg/ml
Hustota výsevu
2 až 4 x 104 buněk/cm2
Obnova tekutin
2 až 3krát týdně
Rozmrazování a kultivace
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Kontrola kvality a kryokonzervace

Sterilita

Kontaminace mykoplazmaty je vyloučena jak pomocí testů založených na PCR, tak pomocí luminiscenčních metod detekce mykoplazmy.

Aby se zajistilo, že nedojde ke kontaminaci bakteriemi, plísněmi nebo kvasinkami, jsou buněčné kultury denně podrobovány vizuálním kontrolám.

Mrazicí médium
Jako kryokonzervační médium používáme kompletní růstové médium (včetně FBS) + 10 % DMSO pro zajištění dostatečné životaschopnosti po rozmrazení nebo CM-1 (katalogové číslo 800100 společnosti Cytion), které obsahuje optimalizované osmoprotektanty a metabolické stabilizátory pro zlepšení regenerace a snížení stresu způsobeného kryo.
Podmínky skladování

Pro dlouhodobé uchování umístěte lahvičky do kapalného dusíku v plynné fázi při teplotě přibližně -150 až -196 °C. Skladování při -80 °C je přijatelné pouze jako krátký přechodný krok před přemístěním do kapalného dusíku.

Dopravní podmínky

Kryokonzervované buněčné linie se přepravují na suchém ledu v ověřených, izolovaných obalech s dostatečným množstvím chladiva, aby se po celou dobu přepravy udržovala teplota přibližně -78 °C. Po obdržení ihned zkontrolujte obal a neprodleně přeneste lahvičky do vhodného skladu.

08Dárce

Plemeno / poddruh
OsborneMendel