Mine otse sisu juurde
NRK-EGFP-H2B
Kude
Neerud
Sünonüümid
NRK EGFP-H2B

Dokumendid

NRK-EGFP-H2B

Cell line · Toote number 500724

NRK-EGFP-H2B rakuliin on normaalse roti neeru (NRK) rakkude geneetiliselt muundatud variant, mis stabiilselt ekspresseerib tugevdatud rohelist fluorestsentsvalku (...

€800.00ilma käibemaksu ja saatmiskuludeta
Tellimusel valmistatud
1

01Üldine teave

Kirjeldus

NRK-EGFP-H2B rakuliin on geneetiliselt muundatud normaalsete roti neerude (NRK) rakkude variant, mis ekspresseerib stabiilselt histoon H2B-ga fundeeritud tugevdatud rohelist fluorestseeruvat valku (EGFP). See modifikatsioon võimaldab kromatiini ja tuumadünaamika visualiseerimist reaalajas, muutes selle rakuliini hindamatuks vahendiks rakutsükli edenemise, mitoosi ja kromatiini korralduse uurimisel. EGFP-H2B stabiilne ekspressioon annab heleda ja järjepideva fluorestseeruva signaali, mis hõlbustab kõrgresolutsiooniga elusraku kujutamist ja võimaldab teadlastel jälgida tuumasündmusi väga täpselt.

NRK rakke, mis pärinevad täiskasvanud roti neerukoes, kasutatakse rakubioloogias laialdaselt nende tugevate kasvuomaduste ja hästi dokumenteeritud füsioloogilise käitumise tõttu. EGFP-H2B fusioonvalgu lisamine nendesse rakkudesse ei muuda oluliselt nende kasvu ega morfoloogiat, võimaldades usaldusväärseid ja korratavaid katsetingimusi. See rakuliin on eriti kasulik neerurakkude bioloogia, rakkude stressile reageerimise ja kantserogeneesi mehhanismide uurimisel, arvestades neerude rolli vere filtreerimisel ja jäätmete väljutamisel. Lisaks saab NRK-EGFP-H2B rakkude fluorestsentsi võimeid kasutada ravimite sõeluuringutes, et jälgida ravimite mõju rakkude proliferatsioonile ja tuumamorfoloogiale reaalajas.

Kude
Neerud
Sünonüümid
  • NRK EGFP-H2B

02Klassifikatsioon

Organism
Rott
Kasvuvõime
Järgija
Bioloogilise ohutuse tase
1

03Omadused

Morfoloogia
Fibroblastitaolised fusiformse kujuga rakud

04Tunnused

Viide
NRK-EGFP-H2B (Cytioni katalooginumber 500724)
NCBI maksukood
10116
Cellosaurus
CVCL_AV92
Hoiustaja
Ellenbergi labor (EMBL)

05Avaldumine ja vastuvõtlikkus

Ekspresseeritud retseptorid
Epidermise kasvufaktor (EGF), paljunemist stimuleeriv toime (MSA)
Valgu ekspressioon
EGFP-H2B: Asukoht/geen: 1..589 / Pcmv, 613..1329 / EGFP, 1387..1764 / H2B, 3001..3795 / KanR/NeoR
Tooted
Epidermise kasvufaktor (EGF), paljunemist stimuleeriv aktiivsus (MSA), CMV Promotor Histoon H2B, Neomütsiin, fosfotransferaas

06Käsitlemine ja kasvatamine

Kasvatuskeskkond
DMEM, w: 4,5 g/L glükoosi, w: 4 mM L-glutamiini, w: 3,7 g/L NaHCO3, w: 1,0 mM naatriumpüruvaati (Cytioni artikli number 820300a)
Inkubatsiooni keskkond

37°C, 5%CO2, niisutatud atmosfäär.

Toidulisandid
Täiendada söötme 10% FBS, 0,5 mg/ml G418-ga
Dissotsiatsioonireaktiiv
Accutase
Kultuuri edasikasvatamine
Visake vana söötme ära ja peske rakud PBSiga. Lisage värskelt valmistatud 0,025% trüpsiini/0,02% EDTA lahust, mida on kuumutatud 37 kraadini, ja oodake, kuni rakud eralduvad, mis tavaliselt võtab umbes 5 minutit. Neutraliseerige trüpsiin, lisades värsket keskkonda, seejärel viige rakusegu katseklaasi ja tsentrifuugige. Pärast tsentrifuugimist eemaldage supernatant, resuspenseerige rakupellet värskes söötmes ja viige suspensioon uutesse kolvidesse. Lisage G418 kultuurikeskkonda, et saavutada lõppkontsentratsioon 0,5 mg/ml
Külvitihedus
2 kuni 4 x 104 rakku/cm2
Vedeliku vahetus
2 kuni 3 korda nädalas
Sulatamine ja kasvatamine
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Kvaliteedikontroll ja krüokonserveerimine

Viljatus

Mükoplasmakontaminatsioon on välistatud nii PCR-põhiste analüüside kui ka luminestsentsil põhinevate mükoplasma tuvastamise meetodite abil.

Bakteriaalse, seene- või pärmsaaste puudumise tagamiseks kontrollitakse rakukultuure iga päev visuaalselt.

Külmutuskeskkond
Krüosäilitusvedelikusena kasutame täielikku kasvukeskkonda (sh FBS) + 10% DMSO, et tagada piisav elujõulisus pärast sulatamist, või CM-1 (Cytioni katalooginumber 800100), mis sisaldab optimeeritud osmoprotektante ja metaboolseid stabilisaatoreid, et parandada taastumist ja vähendada krüostressi.
Säilitamistingimused

Pikaajaliseks säilitamiseks asetage viaalid aurufaasis vedela lämmastikuga umbes -150 kuni -196 °C juures. Säilitamine temperatuuril -80 °C on vastuvõetav ainult lühikese vaheetapina enne vedela lämmastikuga üleviimist.

Tarne- ja kohaletoimetamistingimused

Krüokonserveeritud rakuliinid transporditakse kuiva jääga valideeritud, isoleeritud pakendis, milles on piisavalt külmutusainet, et säilitada kogu transpordi jooksul ligikaudu -78 °C. Vastuvõtmisel kontrollige konteinerit kohe ja viige viaalid viivitamatult sobivasse hoiuruumi.

08Annetaja

Tõug / alamliik
OsborneMendel