A375-GFP

La lignée A375-GFP est une variante génétiquement modifiée de la lignée cellulaire A375 de mélanome malin humain, qui exprime de manière stable la protéine fluorescente verte améliorée (eGFP). La lignée cellulaire parentale A375 est issue d’un mélanome cutané chez un patient adulte et est largement utilisée comme modèle de mélanome cutané, en particulier pour les études portant sur la voie de signalisation oncogénique BRAF, car elle porte la mutation BRAF V600E. Cette mutation entraîne une activation constitutive de la voie MAPK/ERK, favorisant la prolifération et la survie des cellules, ce qui rend les cellules A375 particulièrement pertinentes pour l’étude de thérapies ciblées telles que les inhibiteurs de BRAF et de MEK. La lignée dérivée exprimant la GFP conserve ces caractéristiques moléculaires et phénotypiques tout en permettant des applications basées sur la fluorescence.

L’incorporation stable du rapporteur eGFP permet la visualisation en temps réel des cellules A375-GFP aussi bien dans des systèmes in vitro qu’in vivo. L’imagerie par fluorescence facilite le suivi de la prolifération, de la migration, de l’invasion et des changements morphologiques des cellules, ainsi que le suivi de la croissance tumorale et de la dissémination métastatique dans des modèles de xénogreffes. Cette variante améliorée de la GFP offre une luminosité et une stabilité accrues par rapport aux constructions GFP antérieures, permettant une détection sensible même à de faibles nombres de cellules. Cela rend la lignée A375-GFP particulièrement utile dans les expériences de co-culture, les plateformes d’imagerie à haut contenu et les études nécessitant une résolution spatiale précise du comportement des cellules tumorales.

La lignée A375-GFP conserve le phénotype agressif et prolifératif de la lignée parentale de mélanome, y compris la réactivité aux inhibiteurs de la voie MAPK et la capacité d’invasion et de métastase dans les modèles expérimentaux. L’ajout de la GFP élargit son champ d’application au criblage de médicaments, à l’imagerie de cellules vivantes et aux études sur les interactions entre la tumeur et son microenvironnement. Comme pour les autres lignées cellulaires marquées par un rapporteur, il est recommandé de vérifier la stabilité et la cohérence de la fluorescence au fil des passages pour des applications expérimentales spécifiques.

Modification génétique : modifiée de manière stable par transduction lentivirale à réplication incompétente pour exprimer le rapporteur protéique fluorescent vert ZsGreen1 ; maintenue sous forme de population polyclonale sous sélection à la puromycine (1–5 µg/mL). Confinement S1/BSL-1.

37°C, 5%_CO2, atmosphère humidifiée.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 200 x g for 5 minutes, carefully discard the supernatant containing freezing medium.

7. Follow the procedure described under Post-Thaw Recovery

Pour une conservation à long terme, placer les flacons dans de l'azote liquide en phase vapeur à une température comprise entre -150 et -196 °C environ. Le stockage à -80 °C n'est acceptable qu'en tant qu'étape intermédiaire de courte durée avant le transfert dans l'azote liquide.

Les lignées cellulaires cryoconservées sont expédiées sur glace sèche dans des emballages isolés et validés, avec suffisamment de réfrigérant pour maintenir une température d'environ -78 °C tout au long du transport. À la réception, inspecter immédiatement le conteneur et transférer sans délai les flacons dans un lieu de stockage approprié.

Chez Cytion, nous nous portons garants de la qualité et de la viabilité de nos produits. Nous garantissons que nos cellules seront viables au début de la culture pendant 60 jours après l'expédition de nos installations. Nous assurons que tous les matériaux sont conformes aux spécifications décrites dans le certificat d'analyse et/ou la fiche produit

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