A375-GFP

A375-GFP er en genetisk modificeret variant af den humane maligne melanomcellelinje A375, der stabilt udtrykker forstærket grønt fluorescerende protein (eGFP). Den oprindelige A375-cellelinje stammer fra en hudmelanomtumor hos en voksen patient og anvendes i vid udstrækning som model for kutan melanom, især til undersøgelser af onkogen BRAF-signalering, da den bærer BRAF V600E-mutationen. Denne mutation fører til konstant aktivering af MAPK/ERK-signalvejen, hvilket fremmer celledeling og overlevelse og gør A375-celler særdeles relevante til undersøgelse af målrettede behandlinger, såsom BRAF- og MEK-hæmmere. Den GFP-udtrykkende variant bevarer disse molekylære og fænotypiske egenskaber, samtidig med at den muliggør fluorescensbaserede anvendelser.

Den stabile inkorporering af eGFP-reporteren muliggør visualisering i realtid af A375-GFP-celler i både in vitro- og in vivo-systemer. Fluorescensbilleddannelse letter overvågningen af celleproliferation, migration, invasion og morfologiske ændringer samt sporing af tumorvækst og metastatisk spredning i xenotransplantatmodeller. Den forbedrede GFP-variant giver øget lysstyrke og stabilitet sammenlignet med tidligere GFP-konstruktioner, hvilket muliggør følsom detektion selv ved lave celletal. Dette gør A375-GFP særligt anvendelig i co-kultur-eksperimenter, high-content-billeddannelsesplatforme og undersøgelser, der kræver præcis rumlig opløsning af tumorcellernes adfærd.

A375-GFP bevarer den aggressive og proliferative fænotype fra den oprindelige melanomstamme, herunder reaktionsdygtighed over for MAPK-signalvejsinhibitorer samt evnen til invasion og metastase i eksperimentelle modeller. Tilsætningen af GFP udvider dens anvendelighed til lægemiddelscreening, billeddannelse af levende celler og undersøgelser af interaktionen mellem tumor og mikromiljø. Som med andre reportermærkede cellelinjer anbefales det at validere fluorescensstabiliteten og konsistensen på tværs af passager til specifikke eksperimentelle anvendelser.

Genetisk modifikation: Stabilt modificeret ved replikationsinkompetent lentiviral transduktion til at udtrykke ZsGreen1-reporteren (grønt fluorescerende protein); opbevares som en polyklonal population under puromycin-selektion (1–5 µg/mL). S1/BSL-1-indeslutning.

37°C, 5%_CO2, befugtet atmosfære.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 200 x g for 5 minutes, carefully discard the supernatant containing freezing medium.

7. Follow the procedure described under Post-Thaw Recovery

For langtidsopbevaring anbringes hætteglas i flydende nitrogen i dampfase ved ca. -150 til -196 °C. Opbevaring ved -80 °C er kun acceptabelt som et kort mellemtrin før overførsel til flydende nitrogen.

Kryopræserverede cellelinjer sendes på tøris i valideret, isoleret emballage med tilstrækkeligt kølemiddel til at opretholde ca. -78 °C under hele transporten. Ved modtagelse skal beholderen straks inspiceres, og hætteglassene skal straks overføres til passende opbevaring.

Hos Cytion står vi inde for vores produkters kvalitet og levedygtighed. Vi garanterer, at vores celler vil være levedygtige ved kulturens start i 60 dage efter afsendelse fra vores faciliteter. Vi sikrer, at alle materialer er i overensstemmelse med de specifikationer, der er beskrevet i analysecertifikatet og/eller produktarket

For alle detaljer henvises til vores <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang=""x-default"">Garantierklæring