A375-GFP

A375-GFP es una variante modificada genéticamente de la línea celular A375 de melanoma maligno humano, que expresa de forma estable la proteína fluorescente verde mejorada (eGFP). La línea celular parental A375 se deriva de un tumor de melanoma cutáneo de un paciente adulto y se utiliza ampliamente como modelo de melanoma cutáneo, especialmente en estudios relacionados con la señalización oncogénica de BRAF, ya que presenta la mutación BRAF V600E. Esta mutación provoca la activación constitutiva de la vía MAPK/ERK, lo que impulsa la proliferación y la supervivencia, y hace que las células A375 sean muy relevantes para investigar terapias dirigidas, como los inhibidores de BRAF y MEK. La variante que expresa GFP conserva estas características moleculares y fenotípicas, al tiempo que permite aplicaciones basadas en la fluorescencia.

La incorporación estable del reportero eGFP permite la visualización en tiempo real de las células A375-GFP tanto en sistemas in vitro como in vivo. La obtención de imágenes por fluorescencia facilita el seguimiento de la proliferación, la migración, la invasión y los cambios morfológicos de las células, así como el seguimiento del crecimiento tumoral y la diseminación metastásica en modelos de xenoinjertos. La variante mejorada de GFP ofrece mayor brillo y estabilidad en comparación con construcciones de GFP anteriores, lo que permite una detección sensible incluso con un número reducido de células. Esto hace que A375-GFP resulte especialmente útil en experimentos de cocultivo, plataformas de imagen de alto contenido y estudios que requieran una resolución espacial precisa del comportamiento de las células tumorales.

La línea A375-GFP conserva el fenotipo agresivo y proliferativo de la línea parental de melanoma, incluida la respuesta a los inhibidores de la vía MAPK y la capacidad de invasión y metástasis en modelos experimentales. La incorporación de la GFP amplía su utilidad para el cribado de fármacos, la obtención de imágenes de células vivas y los estudios sobre la interacción entre el tumor y el microambiente. Al igual que con otras líneas celulares marcadas con reporteros, se recomienda validar la estabilidad y la consistencia de la fluorescencia a lo largo de los pases para aplicaciones experimentales específicas.

Modificación genética: Modificada de forma estable mediante transducción con lentivirus incompetente para la replicación para expresar el reportero de proteína fluorescente verde ZsGreen1; se mantiene como una población policlonal bajo selección con puromicina (1-5 µg/mL). Contención S1/BSL-1.

37°C, 5%_CO2, atmósfera humidificada.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 200 x g for 5 minutes, carefully discard the supernatant containing freezing medium.

7. Follow the procedure described under Post-Thaw Recovery

Para la conservación a largo plazo, colocar los viales en nitrógeno líquido en fase vapor a una temperatura aproximada de -150 a -196 °C. El almacenamiento a -80 °C sólo es aceptable como breve paso intermedio antes de la transferencia al nitrógeno líquido.

Las líneas celulares crioconservadas se envían en hielo seco en envases validados y aislados con suficiente refrigerante para mantener aproximadamente -78 °C durante el tránsito. A la recepción, inspeccione el envase inmediatamente y transfiera los viales sin demora al almacenamiento adecuado.

En Cytion, respaldamos la calidad y viabilidad de nuestros productos. Garantizamos que nuestras células serán viables al inicio del cultivo durante los 60 días posteriores al envío desde nuestras instalaciones. Aseguramos que todos los materiales se ajustan a las especificaciones descritas en el Certificado de Análisis y/o Hoja de Producto

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