A375-GFP

A375-GFP es una variante modificada genéticamente de la línea celular A375 de melanoma maligno humano, que expresa de manera estable la proteína fluorescente verde mejorada (eGFP). La línea celular parental A375 se deriva de un tumor de melanoma cutáneo en un paciente adulto y se utiliza ampliamente como modelo para el melanoma cutáneo, particularmente para estudios relacionados con la señalización oncogénica de BRAF, ya que presenta la mutación BRAF V600E. Esta mutación conduce a la activación constitutiva de la vía MAPK/ERK, lo que impulsa la proliferación y la supervivencia, y hace que las células A375 sean altamente relevantes para investigar terapias dirigidas, tales como los inhibidores de BRAF y MEK. La variante que expresa GFP conserva estas características moleculares y fenotípicas, al tiempo que permite aplicaciones basadas en la fluorescencia.

La incorporación estable del reportero eGFP permite la visualización en tiempo real de las células A375-GFP tanto en sistemas in vitro como in vivo. Las imágenes de fluorescencia facilitan el monitoreo de la proliferación, migración, invasión y cambios morfológicos de las células, así como el seguimiento del crecimiento tumoral y la diseminación metastásica en modelos de xenoinjertos. La variante mejorada de GFP ofrece mayor brillo y estabilidad en comparación con construcciones anteriores de GFP, lo que permite una detección sensible incluso con un número reducido de células. Esto hace que A375-GFP sea particularmente útil en experimentos de cocultivo, plataformas de imágenes de alto contenido y estudios que requieren una resolución espacial precisa del comportamiento de las células tumorales.

La línea A375-GFP conserva el fenotipo agresivo y proliferativo de la línea parental de melanoma, incluida la respuesta a los inhibidores de la vía MAPK y la capacidad de invasión y metástasis en modelos experimentales. La incorporación de la GFP amplía su utilidad para el cribado de fármacos, la obtención de imágenes de células vivas y los estudios de interacción entre el tumor y el microambiente. Al igual que con otras líneas celulares marcadas con reporteros, se recomienda validar la estabilidad y consistencia de la fluorescencia a lo largo de los pases para aplicaciones experimentales específicas.

Modificación genética: Modificada de manera estable mediante transducción lentiviral incompetente para la replicación a fin de expresar el reportero de proteína fluorescente verde ZsGreen1; se mantiene como una población policlonal bajo selección con puromicina (1–5 µg/mL). Contención S1/BSL-1.

37 °C, 5 % de CO₂, atmósfera humidificada.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 200 x g for 5 minutes, carefully discard the supernatant containing freezing medium.

7. Follow the procedure described under Post-Thaw Recovery

Para la conservación a largo plazo, coloque los viales en nitrógeno líquido en fase de vapor a una temperatura de entre −150 y −196 °C, aproximadamente. El almacenamiento a −80 °C solo es aceptable como un paso intermedio breve antes de transferirlos al nitrógeno líquido.

Las líneas celulares criopreservadas se envían en hielo seco, en un embalaje aislante validado que contiene suficiente refrigerante para mantener una temperatura de aproximadamente −78 °C durante todo el transporte. Al recibir el envío, revise el contenedor de inmediato y traslade los viales sin demora al lugar de almacenamiento adecuado.

En Cytion, respaldamos la calidad y la viabilidad de nuestros productos. Garantizamos que nuestras células serán viables al inicio del cultivo durante 60 días a partir de la fecha de envío desde nuestras instalaciones. Aseguramos que todos los materiales cumplen con las especificaciones descritas en el Certificado de Análisis y/o la Ficha del Producto.

Para obtener más detalles, consulte nuestra Declaración de garantía.