A375-GFP

A375-GFP е генетично модифициран вариант на клетъчната линия A375 на човешки злокачествен меланом, който стабилно експресира усилван зелен флуоресцентен протеин (eGFP). Първоначалната клетъчна линия A375 е получена от тумор на кожен меланом при възрастен пациент и се използва широко като модел за кожен меланом, особено за изследвания, свързани с онкогенния BRAF сигналинг, тъй като притежава мутацията BRAF V600E. Тази мутация води до конститутивна активация на MAPK/ERK сигналния път, стимулира пролиферацията и оцеляването и прави клетките A375 изключително подходящи за изследване на целеви терапии, като например инхибитори на BRAF и MEK. Дериватът, експресиращ GFP, запазва тези молекулярни и фенотипни характеристики, като същевременно позволява приложения, базирани на флуоресценция.

Стабилното вграждане на репортера eGFP позволява визуализация в реално време на клетките A375-GFP както в системи in vitro, така и в системи in vivo. Флуоресцентната визуализация улеснява наблюдението на клетъчната пролиферация, миграция, инвазия и морфологични промени, както и проследяването на туморния растеж и метастатичното разпространение в модели с ксенографти. Подобреният вариант на GFP осигурява по-добра яркост и стабилност в сравнение с по-ранните GFP конструкции, което позволява чувствително откриване дори при малък брой клетки. Това прави A375-GFP особено полезен при експерименти с кокултури, платформи за изображения с високо съдържание и изследвания, изискващи прецизна пространствена резолюция на поведението на туморните клетки.

A375-GFP запазва агресивния и пролиферативен фенотип на родителската линия на меланом, включително отзивчивостта към инхибитори на MAPK пътя и способността за инвазия и метастазиране в експериментални модели. Добавянето на GFP разширява приложимостта ѝ за скрининг на лекарства, визуализация на живи клетки и изследвания на взаимодействието между тумора и микросредата. Както и при други клетъчни линии, маркирани с репортер, за конкретни експериментални приложения се препоръчва валидиране на стабилността и постоянството на флуоресценцията през различните пасажи.

Генетична модификация: Стабилно модифицирана чрез репликационно-некомпетентна лентивирусна трансдукция за експресия на репортера зелен флуоресцентен протеин ZsGreen1; поддържана като поликлонална популация при селекция с пуромицин (1–5 µg/mL). Ниво на биологична безопасност S1/BSL-1.

37°C, 5%_CO2, овлажнена атмосфера.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 200 x g for 5 minutes, carefully discard the supernatant containing freezing medium.

7. Follow the procedure described under Post-Thaw Recovery

За дълготрайно съхранение поставете флаконите в течен азот в парна фаза при температура около -150 до -196 °C. Съхранението при -80 °C е приемливо само като кратък междинен етап преди прехвърлянето в течен азот.

Криоконсервираните клетъчни линии се транспортират върху сух лед в утвърдени, изолирани опаковки с достатъчно хладилен агент, за да се поддържа приблизително -78 °C по време на транспортирането. При получаването незабавно прегледайте опаковката и незабавно прехвърлете флаконите за подходящо съхранение.

Ние в Cytion заставаме зад качеството и жизнеспособността на нашите продукти. Гарантираме, че нашите клетки ще бъдат жизнеспособни в началото на култивирането в продължение на 60 дни след изпращането им от нашите съоръжения. Гарантираме, че всички материали отговарят на спецификациите, описани в сертификата за анализ и/или продуктовата листа

За пълни подробности, моля, направете справка с нашата <a href=""/Кои сме ние/Гаранция/"" hreflang=""x-default"">Гаранционна декларация