A375-GFP

A375-GFP הוא וריאנט מהונדס גנטית של קו התאים A375 של מלנומה ממאירה אנושית, המבטא באופן יציב חלבון פלואורסצנטי ירוק משופר (eGFP). קו התאים ההורי A375 נגזר מגידול מלנומה בעור של מטופל בוגר, והוא נמצא בשימוש נרחב כמודל למלנומה עורית, במיוחד במחקרים העוסקים באיתות BRAF אונקוגני, שכן הוא נושא את המוטציה BRAF V600E. מוטציה זו מובילה להפעלה קבועה של מסלול ה-MAPK/ERK, המניעה התרבות והישרדות, והופכת את תאי A375 לרלוונטיים ביותר לחקר טיפולים ממוקדים כגון מעכבי BRAF ו-MEK. הנגזרת המבטאת GFP שומרת על מאפיינים מולקולריים ופנוטיפיים אלה, תוך שהיא מאפשרת יישומים מבוססי פלואורסצנציה.

השילוב היציב של הרפורט eGFP מאפשר הדמיה בזמן אמת של תאי A375-GFP הן במערכות in vitro והן במערכות in vivo. הדמיה פלואורסצנטית מקלה על מעקב אחר התרבות תאים, נדידה, פלישה ושינויים מורפולוגיים, כמו גם על מעקב אחר צמיחת הגידול והתפשטות גרורתית במודלים של שתלים זרים. הגרסה המשופרת של GFP מספקת בהירות ויציבות משופרות בהשוואה למבנים קודמים של GFP, ומאפשרת זיהוי רגיש אפילו במספר תאים נמוך. דבר זה הופך את A375-GFP לשימושי במיוחד בניסויי תרבית משותפת, בפלטפורמות הדמיה בעלות תוכן גבוה ובמחקרים הדורשים רזולוציה מרחבית מדויקת של התנהגות תאי הגידול.

A375-GFP שומר על הפנוטיפ האגרסיבי והמתרבה של קו המלנומה ההורי, כולל תגובתיות למעכבי מסלול ה-MAPK ויכולת הפלישה והגרורות במודלים ניסיוניים. הוספת ה-GFP מרחיבה את השימושיות שלו לסינון תרופות, הדמיית תאים חיים ומחקרים על האינטראקציה בין הגידול לסביבה המיקרו-סביבתית. כמו בקווי תאים מסומנים אחרים, מומלץ לאמת את יציבות ועקביות הפלואורסצנציה לאורך מחזורי התרבות, בהתאם ליישומים ניסויים ספציפיים.

שינוי גנטי: שונה באופן יציב באמצעות העברה לנטרווירוס שאינו מסוגל לשכפל את עצמו, כדי לבטא את הרפורט של החלבון הזוהר הירוק ZsGreen1; נשמר כאוכלוסייה פוליקלונלית תחת סלקציה של פורומיצין (1–5 µg/mL). רמת אבטחה S1/BSL-1.

37°C, 5%_CO2, אווירה לחה.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 200 x g for 5 minutes, carefully discard the supernatant containing freezing medium.

7. Follow the procedure described under Post-Thaw Recovery

לשימור לטווח ארוך, יש להניח את הבקבוקונים בחנקן נוזלי במצב של אדי בטמפרטורה של כ-150 עד 196 מעלות צלזיוס. אחסון בטמפרטורה של 80 מעלות צלזיוס מקובל רק כצעד ביניים קצר לפני העברה לחנקן נוזלי.

שורות תאים שהוקפאו נשלחות בקרח יבש באריזה מאושרת ומבודדת עם כמות מספקת של חומר קירור כדי לשמור על טמפרטורה של כ-78°C- במהלך ההובלה. עם קבלת המשלוח, יש לבדוק את המכל מיד ולהעביר את הבקבוקונים ללא דיחוי לאחסון מתאים.

ב-Cytion, אנו עומדים מאחורי האיכות והכדאיות של המוצרים שלנו. אנו מבטיחים שתאינו יהיו קיימים בתחילת התרבית למשך 60 יום לאחר המשלוח מהמתקנים שלנו. אנו מבטיחים שכל החומרים תואמים למפרטים המתוארים בתעודת הניתוח ו/או בדף המוצר.

לפרטים מלאים, אנא עיינו ב <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang=""x-default"">הצהרת האחריות שלנו