A375-GFP

Az A375-GFP az A375 nevű humán malignus melanoma sejtvonal géntechnológiai úton létrehozott változata, amely stabil módon expresszálja a fokozott zöld fluoreszcens fehérjét (eGFP). Az eredeti A375 sejtvonal egy felnőtt beteg bőrmelanómájából származik, és széles körben használják a bőrmelanóma modelljeként, különösen az onkogén BRAF jelátvitelre irányuló kutatásokban, mivel hordozza a BRAF V600E mutációt. Ez a mutáció a MAPK/ERK jelátviteli út konstitutív aktiválódásához vezet, ami elősegíti a sejtek szaporodását és túlélését, így az A375 sejtek rendkívül alkalmasak olyan célzott terápiák vizsgálatára, mint a BRAF- és MEK-gátlók. A GFP-t expresszáló származék megőrzi ezeket a molekuláris és fenotípusos jellemzőket, miközben lehetővé teszi a fluoreszcencia-alapú alkalmazásokat.

Az eGFP-riporter stabil beépítése lehetővé teszi az A375-GFP sejtek valós idejű vizualizálását mind in vitro, mind in vivo rendszerekben. A fluoreszcens képalkotás megkönnyíti a sejtek proliferációjának, migrációjának, inváziójának és morfológiai változásainak nyomon követését, valamint a tumor növekedésének és a metasztatikus terjedésnek a nyomon követését xenotranszplantációs modellekben. A továbbfejlesztett GFP-variáns jobb fényerőt és stabilitást biztosít a korábbi GFP-konstrukciókhoz képest, így alacsony sejtszám esetén is érzékeny detektálást tesz lehetővé. Ez az A375-GFP-t különösen hasznossá teszi ko-kultúra kísérletekben, nagy felbontású képalkotó platformokon, valamint olyan vizsgálatokban, amelyek a tumorsejtek viselkedésének pontos térbeli felbontását igénylik.

Az A375-GFP megőrzi a szülői melanóma-vonal agresszív és proliferatív fenotípusát, beleértve a MAPK-útvonal-gátlókra való reagálóképességet, valamint az inváziós és metasztatikus képességet kísérleti modellekben. A GFP hozzáadása kiterjeszti alkalmazhatóságát a gyógyszerszűrés, az élősejt-képalkotás és a tumor–mikrokörnyezet kölcsönhatásának vizsgálata terén. Más riporterrel jelölt sejtvonalakhoz hasonlóan konkrét kísérleti alkalmazások esetén ajánlott a fluoreszcencia stabilitásának és a passzázsok közötti konzisztenciájának validálása.

Genetikai módosítás: Replikációra képtelen lentivirális transzdukcióval stabilan módosítva a ZsGreen1 zöld fluoreszcens fehérje-riporter expressziójára; puromicin-szelekció (1–5 µg/mL) alatt poliklonális populációként tartva. S1/BSL-1 biztonsági szint.

37°C, 5%_CO2, párásított légkör.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 200 x g for 5 minutes, carefully discard the supernatant containing freezing medium.

7. Follow the procedure described under Post-Thaw Recovery

Hosszú távú tartósítás céljából helyezze az üvegeket gőzfázisú folyékony nitrogénbe, körülbelül -150 és -196 °C közötti hőmérsékleten. A -80 °C-on történő tárolás csak rövid átmeneti lépésként fogadható el a folyékony nitrogénbe való átvitel előtt.

A kriokonzervált sejtvonalakat szárazjégen, validált, szigetelt csomagolásban szállítják, elegendő hűtőközeggel, hogy a szállítás során a hőmérsékletet körülbelül -78 °C-on tartsák. Átvételkor azonnal vizsgálja meg a tárolóedényt, és haladéktalanul helyezze át az injekciós üvegeket a megfelelő tárolóhelyre.

A Cytionnál kiállunk termékeink minősége és életképessége mellett. Garantáljuk, hogy sejtjeink a tenyésztés megkezdésekor életképesek lesznek, a létesítményünkből történő kiszállítás után 60 napig. Biztosítjuk, hogy minden anyag megfelel az analitikai tanúsítványban és/vagy a terméklapon leírt specifikációknak

A teljes részleteket lásd <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang="""x-default"">Garancia nyilatkozatunkban