A375-GFP

A375-GFP é uma variante geneticamente modificada da linhagem celular A375 de melanoma maligno humano, que expressa de forma estável a proteína fluorescente verde aprimorada (eGFP). A linhagem celular parental A375 é derivada de um tumor de melanoma cutâneo em um paciente adulto e é amplamente utilizada como modelo para o melanoma cutâneo, particularmente para estudos envolvendo a sinalização oncogênica do BRAF, uma vez que abriga a mutação BRAF V600E. Essa mutação leva à ativação constitutiva da via MAPK/ERK, promovendo a proliferação e a sobrevivência, e tornando as células A375 altamente relevantes para a investigação de terapias direcionadas, como inibidores de BRAF e MEK. A variante que expressa GFP mantém essas características moleculares e fenotípicas, ao mesmo tempo em que permite aplicações baseadas em fluorescência.

A incorporação estável do repórter eGFP permite a visualização em tempo real das células A375-GFP tanto em sistemas in vitro quanto in vivo. A imagem por fluorescência facilita o monitoramento da proliferação, migração, invasão e alterações morfológicas das células, bem como o acompanhamento do crescimento tumoral e da disseminação metastática em modelos de xenoenxertos. A variante aprimorada da GFP oferece maior brilho e estabilidade em comparação com construções anteriores de GFP, permitindo detecção sensível mesmo com baixos números de células. Isso torna a A375-GFP particularmente útil em experimentos de cocultura, plataformas de imagem de alto conteúdo e estudos que exigem resolução espacial precisa do comportamento das células tumorais.

A375-GFP mantém o fenótipo agressivo e proliferativo da linhagem parental de melanoma, incluindo a responsividade a inibidores da via MAPK e a capacidade de invasão e metástase em modelos experimentais. A adição da GFP amplia sua utilidade para triagem de medicamentos, imagem de células vivas e estudos de interação entre o tumor e o microambiente. Assim como em outras linhagens celulares marcadas com repórter, recomenda-se a validação da estabilidade e consistência da fluorescência ao longo das passagens para aplicações experimentais específicas.

Modificação genética: Modificada de forma estável por transdução lentiviral incompetente para replicação, a fim de expressar o repórter da proteína fluorescente verde ZsGreen1; mantida como uma população policlonal sob seleção com puromicina (1–5 µg/mL). Contenção S1/BSL-1.

37 °C, 5% de CO₂, atmosfera umidificada.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 200 x g for 5 minutes, carefully discard the supernatant containing freezing medium.

7. Follow the procedure described under Post-Thaw Recovery

Para preservação a longo prazo, coloque os frascos em nitrogênio líquido em fase de vapor a uma temperatura entre aproximadamente −150 e −196 °C. O armazenamento a −80 °C é aceitável apenas como uma etapa intermediária de curta duração antes da transferência para o nitrogênio líquido.

As linhagens celulares criopreservadas são enviadas em gelo seco, em embalagens isoladas e validadas, com refrigerante suficiente para manter a temperatura em aproximadamente −78 °C durante todo o transporte. Ao receber a remessa, inspecione o recipiente imediatamente e transfira os frascos sem demora para o local de armazenamento adequado.

Na Cytion, garantimos a qualidade e a viabilidade de nossos produtos. Garantimos que nossas células permanecerão viáveis no início da cultura por 60 dias após o envio de nossas instalações. Asseguramos que todos os materiais estão em conformidade com as especificações descritas no Certificado de Análise e/ou na Ficha Técnica do Produto.

Para obter todos os detalhes, consulte nossa Declaração de Garantia.