A375-GFP

A375-GFP è una variante geneticamente modificata della linea cellulare A375 del melanoma maligno umano, che esprime in modo stabile la proteina fluorescente verde potenziata (eGFP). La linea cellulare parentale A375 deriva da un tumore di melanoma cutaneo in un paziente adulto ed è ampiamente utilizzata come modello per il melanoma cutaneo, in particolare per studi che coinvolgono la segnalazione oncogenica di BRAF, poiché presenta la mutazione BRAF V600E. Questa mutazione porta all’attivazione costitutiva della via MAPK/ERK, favorendo la proliferazione e la sopravvivenza delle cellule e rendendo le cellule A375 particolarmente rilevanti per lo studio di terapie mirate, quali gli inibitori di BRAF e MEK. Il derivato che esprime la GFP conserva queste caratteristiche molecolari e fenotipiche, consentendo al contempo applicazioni basate sulla fluorescenza.

L’incorporazione stabile del reporter eGFP consente la visualizzazione in tempo reale delle cellule A375-GFP sia in sistemi in vitro che in vivo. L’imaging a fluorescenza facilita il monitoraggio della proliferazione, della migrazione, dell’invasione e dei cambiamenti morfologici delle cellule, nonché il tracciamento della crescita tumorale e della diffusione metastatica nei modelli di xenotrapianto. La variante potenziata della GFP offre maggiore luminosità e stabilità rispetto ai precedenti costrutti GFP, consentendo un rilevamento sensibile anche in presenza di un numero ridotto di cellule. Ciò rende l’A375-GFP particolarmente utile negli esperimenti di cocultura, nelle piattaforme di imaging ad alto contenuto e negli studi che richiedono una risoluzione spaziale precisa del comportamento delle cellule tumorali.

A375-GFP mantiene il fenotipo aggressivo e proliferativo della linea di melanoma parentale, compresa la risposta agli inibitori della via MAPK e la capacità di invasione e metastasi nei modelli sperimentali. L’aggiunta della GFP ne amplia l’utilità per lo screening farmacologico, l’imaging su cellule vive e gli studi sull’interazione tra tumore e microambiente. Come per altre linee cellulari marcate con reporter, per applicazioni sperimentali specifiche si raccomanda la validazione della stabilità e dell’uniformità della fluorescenza nel corso dei passaggi.

Modifica genetica: modificata in modo stabile tramite trasduzione lentivirale a replicazione incompetente per esprimere il reporter della proteina fluorescente verde ZsGreen1; mantenuta come popolazione policlonale sotto selezione con puromicina (1–5 µg/mL). Contenimento S1/BSL-1.

37°C, 5%_CO2, atmosfera umidificata.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 200 x g for 5 minutes, carefully discard the supernatant containing freezing medium.

7. Follow the procedure described under Post-Thaw Recovery

Per la conservazione a lungo termine, porre le fiale in azoto liquido in fase vapore a una temperatura compresa tra -150 e -196 °C circa. La conservazione a -80 °C è accettabile solo come breve fase intermedia prima del trasferimento in azoto liquido.

Le linee cellulari crioconservate vengono spedite su ghiaccio secco in confezioni isolate e convalidate, con una quantità di refrigerante sufficiente a mantenere circa -78 °C durante il trasporto. Al ricevimento, ispezionare immediatamente il contenitore e trasferire immediatamente le fiale in un luogo di conservazione appropriato.

Noi di Cytion garantiamo la qualità e la vitalità dei nostri prodotti. Garantiamo che le nostre cellule saranno vitali all'inizio della coltura per 60 giorni dopo la spedizione dai nostri stabilimenti. Assicuriamo che tutti i materiali sono conformi alle specifiche descritte nel Certificato di Analisi e/o nella Scheda Prodotto

Per tutti i dettagli, consultare la nostra <a href=""/Chi-siamo/Garanzia/"" hreflang=""x-default"">Dichiarazione di Garanzia