A375-GFP

A375-GFP, insan malign melanom hücre hattı A375’in, güçlendirilmiş yeşil floresan proteini (eGFP) istikrarlı bir şekilde eksprese eden, genetik olarak değiştirilmiş bir varyantıdır. Ana A375 hücre hattı, yetişkin bir hastanın deri melanom tümöründen elde edilmiştir ve BRAF V600E mutasyonunu barındırması nedeniyle, özellikle onkojenik BRAF sinyal iletimi ile ilgili çalışmalarda, kutanöz melanom modeli olarak yaygın olarak kullanılmaktadır. Bu mutasyon, MAPK/ERK yolunun sürekli aktivasyonuna yol açarak hücre çoğalmasını ve hayatta kalmasını teşvik eder; bu da A375 hücrelerini, BRAF ve MEK inhibitörleri gibi hedefe yönelik tedavilerin araştırılması açısından son derece uygun hale getirir. GFP eksprese eden bu türev, floresan tabanlı uygulamalara olanak sağlarken bu moleküler ve fenotipik özellikleri de korur.

eGFP raportörünün stabil bir şekilde entegre edilmesi, hem in vitro hem de in vivo sistemlerde A375-GFP hücrelerinin gerçek zamanlı olarak görüntülenmesini sağlar. Floresan görüntüleme, hücre çoğalması, göçü, istilası ve morfolojik değişikliklerin izlenmesinin yanı sıra, ksenograft modellerinde tümör büyümesinin ve metastatik yayılımın takip edilmesini kolaylaştırır. Geliştirilmiş GFP varyantı, önceki GFP yapılarına kıyasla daha yüksek parlaklık ve stabilite sunarak, düşük hücre sayılarında bile hassas tespit yapılmasını sağlar. Bu özellik, A375-GFP'yi ko-kültür deneylerinde, yüksek içerikli görüntüleme platformlarında ve tümör hücresi davranışının hassas uzamsal çözünürlüğünü gerektiren çalışmalarda özellikle kullanışlı kılar.

A375-GFP, MAPK yolak inhibitörlerine yanıt verme özelliği ve deneysel modellerde invazyon ve metastaz kapasitesi dahil olmak üzere, ana melanom hattının agresif ve proliferatif fenotipini korur. GFP'nin eklenmesi, ilaç taraması, canlı hücre görüntüleme ve tümör-mikroortam etkileşimi çalışmaları için kullanım alanını genişletir. Diğer raportör etiketli hücre hatlarında olduğu gibi, belirli deneysel uygulamalar için pasajlar boyunca floresan stabilitesinin ve tutarlılığının doğrulanması önerilir.

Genetik modifikasyon: ZsGreen1 yeşil floresan protein raportörünü eksprese etmek üzere replikasyon yeteneği olmayan lentiviral transdüksiyon yoluyla stabil bir şekilde modifiye edilmiştir; puromisin seleksiyonu (1–5 µg/mL) altında poliklonal bir popülasyon olarak muhafaza edilir. S1/BSL-1 güvenlik seviyesinde tutulur.

37°C, %5_CO2, nemlendirilmiş atmosfer.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 200 x g for 5 minutes, carefully discard the supernatant containing freezing medium.

7. Follow the procedure described under Post-Thaw Recovery

Uzun süreli muhafaza için flakonları yaklaşık -150 ila -196 °C'de buhar fazlı sıvı nitrojen içine yerleştirin. 80 °C'de saklama yalnızca sıvı nitrojene aktarılmadan önce kısa bir ara adım olarak kabul edilebilir.

Kriyoprezerve edilmiş hücre hatları, nakliye boyunca yaklaşık -78 °C'yi korumak için yeterli soğutucu akışkan içeren, onaylanmış, yalıtılmış ambalajlarda kuru buz üzerinde gönderilir. Teslim aldığınızda, kabı hemen inceleyin ve flakonları gecikmeden uygun depoya aktarın.

Cytion olarak ürünlerimizin kalitesinin ve canlılığının arkasındayız. Hücrelerimizin, tesislerimizden sevkiyattan sonra 60 gün boyunca kültürün başlangıcında canlı olacağını garanti ediyoruz. Tüm malzemelerin Analiz Sertifikası ve/veya Ürün Sayfasında açıklanan özelliklere uygun olduğunu garanti ediyoruz

Tüm ayrıntılar için lütfen <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang=""x-default"">Garanti Beyanımıza bakın