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A375-GFP
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A375-GFP

Cell line · 제품 번호 305665

A375-GFP is a genetically engineered variant of the human malignant melanoma cell line A375, stably expressing enhanced green fluorescent protein (eGFP). ...

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사용자 지정 / 추천 사항

재고 있음
롯
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1

01일반 정보

설명

A375-GFP는 인간 악성 흑색종 세포주 A375를 유전자 조작하여 만든 변이체로, 강화형 녹색 형광 단백질(eGFP)을 안정적으로 발현합니다. 모세포주인 A375 세포주는 성인 환자의 피부 흑색종 종양에서 유래되었으며, BRAF V600E 돌연변이를 보유하고 있어 피부 흑색종 모델, 특히 발암성 BRAF 신호전달 경로와 관련된 연구에 널리 사용됩니다. 이 돌연변이는 MAPK/ERK 경로의 상시 활성화를 유발하여 증식과 생존을 촉진하므로, A375 세포는 BRAF 및 MEK 억제제와 같은 표적 치료법 연구에 매우 적합합니다. GFP를 발현하는 이 파생 세포주는 이러한 분자적 및 표현형적 특성을 유지하면서 형광 기반 응용을 가능하게 합니다.

eGFP 리포터가 안정적으로 도입됨에 따라 체외 및 생체 내 시스템 모두에서 A375-GFP 세포를 실시간으로 시각화할 수 있습니다. 형광 이미징을 통해 세포 증식, 이동, 침윤 및 형태학적 변화를 모니터링할 수 있을 뿐만 아니라, 이종 이식 모델에서 종양 성장과 전이 확산을 추적하는 데에도 도움이 됩니다. 향상된 GFP 변이체는 기존 GFP 구조체에 비해 밝기와 안정성이 개선되어, 세포 수가 적은 경우에도 민감한 검출이 가능합니다. 이로 인해 A375-GFP는 공배양 실험, 고내용 이미징 플랫폼, 그리고 종양 세포의 행동에 대한 정밀한 공간적 분해능이 필요한 연구에서 특히 유용합니다.

A375-GFP는 MAPK 경로 억제제에 대한 반응성 및 실험 모델에서의 침윤 및 전이 능력을 포함하여, 모체 흑색종 계통의 공격적이고 증식적인 표현형을 유지합니다. GFP의 추가로 인해 약물 스크리닝, 생세포 이미징 및 종양-미세환경 상호작용 연구에 대한 활용도가 확대됩니다. 다른 리포터 표지 세포주와 마찬가지로, 특정 실험 용도에 사용하기 위해서는 배양 세대 간 형광 안정성 및 일관성을 검증할 것을 권장합니다.

유전적 변형: 복제 불능 렌티바이러스 형질 도입을 통해 ZsGreen1 녹색 형광 단백질 리포터를 발현하도록 안정적으로 변형되었으며, 푸로마이신(1–5 µg/mL) 선별 하에서 다클론성 집단으로 유지됩니다. S1/BSL-1 격리 등급.

티슈
다리, 피부
질병
흑색종 흑색종

02분류

생물체
인간
성
여성
성장 특성
준수자
유전자 변형 여부
GMO-S1
유전자 변형 생물(GMO) 여부 상세 정보
GMO-S1: This cell line contains a stably integrated ZsGreen1 green fluorescent protein reporter introduced via replication-incompetent lentiviral transduction. The resulting polyclonal cell population was maintained under puromycin selection (1–5 µg/mL). S1 containment is required. This classification applies only within Germany and may differ elsewhere.
생물안전 등급
1

03식별자

인용
A375-GFP (Cytion 제품 번호 305665)
NCBI 세금 식별번호
9606
셀로사우루스
CVCL_QZ67

04발현 및 감수성

항원 발현
ZsGreen1 (녹색 형광 단백질)
돌연변이 프로파일
돌연변이: BRAF, 단순 돌연변이, p.Val600Glu (c.1799T>A), 동형접합 (부모 세포주 유래).돌연변이, CDKN2A, 단순, p.Glu61Ter (c.181G>T) (p.Gly75Val, c.224G>T), 동형접합 (모세포주 유래).돌연변이, CDKN2A, 단순, p.Glu69Ter (c.205G>T) (p.Gly83Val, c.248G>T), 동형접합 (모세포주 유래).돌연변이, TERT, 단순, c.1-146C>T (c.250C>T) (C250T), 미지정, 참고=프로모터 내 (모세포주 유래).

05취급 및 배양

배지
DMEM, w: 4.5g/L 포도당, w: 4mM L-글루타민, w: 3.7g/L NaHCO3, w: 1.0mM 피루브산 나트륨(사이티온 제품 번호 820300a)
배양 조건

37°C, 5%CO2, 습한 대기.

건강보조식품
10% FBS로 배지를 보충합니다
분리 시약
아큐타제
재배양
부착된 세포에서 오래된 배지를 제거하고 칼슘과 마그네슘이 없는 PBS로 세척합니다. T25 플라스크의 경우 3~5ml, T75 플라스크의 경우 5~10ml의 PBS를 사용합니다. 그런 다음 T25 플라스크의 경우 1~2㎖, T75 플라스크의 경우 2.5㎖를 사용하여 세포를 Accutase로 완전히 덮습니다. 세포를 분리하기 위해 실온에서 8~10분간 배양합니다. 배양 후 세포를 배지 10ml와 부드럽게 혼합하여 재부유시킨 다음 300xg에서 3분간 원심분리합니다. 상층액을 버리고 세포를 신선한 배지에 다시 부유시킨 후 이미 신선한 배지가 들어 있는 새 플라스크에 옮깁니다.
파종 밀도
1~3 × 10⁴ 세포/cm²
유체 교체
주 2~3회
해동 및 배양

  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 200 x g for 5 minutes, carefully discard the supernatant containing freezing medium.

  7. Follow the procedure described under Post-Thaw Recovery

06품질 관리 및 냉동 보존

배양액 동결
동결 보존 배지로 해동 후 충분한 생존력을 위해 완전 성장 배지 + 10% DMSO를 사용합니다.
보관 조건

장기 보존을 위해서는 바이알을 약 -150°C에서 -196°C의 증기상 액체 질소에 넣으세요. 80°C에서 보관하는 것은 액체 질소로 옮기기 전 짧은 중간 단계로만 허용됩니다.

배송 조건

냉동 보존 세포주는 운송 중 약 -78°C를 유지할 수 있는 충분한 냉매가 포함된 검증된 단열 포장에 드라이아이스를 넣어 배송됩니다. 수령 즉시 용기를 검사하고 바이알을 지체 없이 적절한 보관 장소로 옮깁니다.

07기부자

기증자 연령
54년
민족
백인