A375-GFP

A375-GFP é uma variante geneticamente modificada da linha celular A375 de melanoma maligno humano, que expressa de forma estável a proteína fluorescente verde melhorada (eGFP). A linha celular parental A375 é derivada de um tumor de melanoma cutâneo num doente adulto e é amplamente utilizada como modelo para o melanoma cutâneo, particularmente em estudos que envolvem a sinalização oncogénica do BRAF, uma vez que apresenta a mutação BRAF V600E. Esta mutação conduz à ativação constitutiva da via MAPK/ERK, impulsionando a proliferação e a sobrevivência, e tornando as células A375 altamente relevantes para a investigação de terapias direcionadas, tais como os inibidores de BRAF e MEK. O derivado que expressa GFP mantém estas características moleculares e fenotípicas, permitindo simultaneamente aplicações baseadas na fluorescência.

A incorporação estável do repórter eGFP permite a visualização em tempo real das células A375-GFP tanto em sistemas in vitro como in vivo. A imagiologia por fluorescência facilita a monitorização da proliferação, migração, invasão e alterações morfológicas das células, bem como o acompanhamento do crescimento tumoral e da disseminação metastática em modelos de xenoenxertos. A variante melhorada da GFP proporciona maior brilho e estabilidade em comparação com construções anteriores de GFP, permitindo uma deteção sensível mesmo com baixos números de células. Isto torna a A375-GFP particularmente útil em experiências de cocultura, plataformas de imagiologia de alto conteúdo e estudos que requerem uma resolução espacial precisa do comportamento das células tumorais.

A375-GFP mantém o fenótipo agressivo e proliferativo da linha parental de melanoma, incluindo a resposta aos inibidores da via MAPK e a capacidade de invasão e metástase em modelos experimentais. A adição de GFP alarga a sua utilidade para o rastreio de fármacos, a imagiologia de células vivas e estudos sobre a interação entre o tumor e o microambiente. Tal como acontece com outras linhas celulares marcadas com repórteres, recomenda-se a validação da estabilidade e consistência da fluorescência ao longo das passagens para aplicações experimentais específicas.

Modificação genética: Modificada de forma estável por transdução lentiviral incompetente para replicação, de modo a expressar o repórter da proteína fluorescente verde ZsGreen1; mantida como uma população policlonal sob seleção com puromicina (1–5 µg/mL). Nível de contenção S1/BSL-1.

37°C, 5%_CO2, atmosfera humidificada.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 200 x g for 5 minutes, carefully discard the supernatant containing freezing medium.

7. Follow the procedure described under Post-Thaw Recovery

Para conservação a longo prazo, colocar os frascos em azoto líquido em fase de vapor a uma temperatura entre -150 e -196 °C. O armazenamento a -80 °C é aceitável apenas como um curto passo intermédio antes da transferência para azoto líquido.

As linhas celulares criopreservadas são expedidas em gelo seco em embalagens validadas e isoladas com refrigerante suficiente para manter aproximadamente -78 °C durante o transporte. Aquando da receção, inspecionar imediatamente o recipiente e transferir sem demora os frascos para um local de armazenamento adequado.

Na Cytion, nós garantimos a qualidade e a viabilidade de nossos produtos. Garantimos que nossas células serão viáveis no início da cultura por 60 dias após o envio de nossas instalações. Asseguramos que todos os materiais estão em conformidade com as especificações descritas no Certificado de Análise e/ou Folha de Produto

Para mais informações, consulte a nossa <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang=""x-default"">Declaração de Garantia