A375-GFP

A375-GFP yra genetiškai modifikuotas žmogaus piktybinės melanomos ląstelių linijos A375 variantas, kuriame stabiliai ekspresuojamas sustiprintas žaliasis fluorescuojantis baltymas (eGFP). Pirminė A375 ląstelių linija yra gauta iš suaugusio paciento odos melanomos naviko ir plačiai naudojama kaip odos melanomos modelis, ypač tyrimuose, susijusiuose su onkogeniniu BRAF signalizavimu, nes joje yra BRAF V600E mutacija. Ši mutacija sukelia nuolatinę MAPK/ERK signalo kelio aktyvaciją, skatinančią ląstelių proliferaciją ir išlikimą, todėl A375 ląstelės yra labai tinkamos tikslinio gydymo, pavyzdžiui, BRAF ir MEK inhibitorių, tyrimams. GFP ekspresuojantis variantas išlaiko šias molekulinės ir fenotipines savybes, tuo pačiu sudarydamas galimybes taikyti fluorescencijos pagrįstus metodus.

Stabilus eGFP reporterio įterpimas leidžia realiuoju laiku stebėti A375-GFP ląsteles tiek in vitro, tiek in vivo sistemose. Fluorescencinis vaizdavimas palengvina ląstelių proliferacijos, migracijos, invazijos ir morfologinių pokyčių stebėjimą, taip pat naviko augimo ir metastazių plitimo sekimą ksenotransplantacijos modeliuose. Patobulintas GFP variantas, palyginti su ankstesniais GFP konstruktas, užtikrina didesnį ryškumą ir stabilumą, todėl leidžia jautriai aptikti net esant mažam ląstelių skaičiui. Dėl to A375-GFP yra ypač naudinga atliekant bendros kultūros eksperimentus, naudojant didelės informacijos talpos vaizdinimo platformas ir atliekant tyrimus, kuriuose reikalinga tiksli naviko ląstelių elgesio erdvinė skiriamoji geba.

A375-GFP išlaiko pirminės melanomos linijos agresyvų ir proliferacinį fenotipą, įskaitant reakciją į MAPK kelio inhibitorius bei invazijos ir metastazavimo gebėjimus eksperimentiniuose modeliuose. GFP įtraukimas išplečia jo pritaikymo galimybes vaistų atrankai, gyvų ląstelių vaizdinimui ir naviko bei mikroaplinkos sąveikos tyrimams. Kaip ir kitų reporteriniu žymekliu pažymėtų ląstelių linijų atveju, konkretiems eksperimentiniams taikymams rekomenduojama patikrinti fluorescencijos stabilumą ir nuoseklumą per visus pasėlių kartus.

Genetinė modifikacija: stabiliai modifikuota replikacijos nesugebančiu lentivirusiniu transdukavimu, kad ekspresuotų „ZsGreen1“ žalios fluorescencijos baltymo reporterį; išlaikoma kaip polikloninė populiacija, atrinkta puromicinu (1–5 µg/mL). S1/BSL-1 saugumo lygis.

37 °C, 5 %_CO2, drėkintoje atmosferoje.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 200 x g for 5 minutes, carefully discard the supernatant containing freezing medium.

7. Follow the procedure described under Post-Thaw Recovery

Norėdami ilgai saugoti, įdėkite buteliukus į garų fazės skystą azotą maždaug -150-196 °C temperatūroje. Laikymas -80 °C temperatūroje yra priimtinas tik kaip trumpas tarpinis etapas prieš perkeliant į skystąjį azotą.

Kriokonservuotos ląstelių linijos gabenamos ant sauso ledo patvirtintoje, izoliuotoje pakuotėje su pakankamu kiekiu šaldymo skysčio, kad pervežimo metu būtų palaikoma maždaug -78 °C temperatūra. Gavę pakuotę, nedelsdami ją apžiūrėkite ir nedelsdami perkelkite mėgintuvėlius į tinkamą saugyklą.

" Cytion" garantuoja savo produktų kokybę ir gyvybingumą. Garantuojame, kad mūsų ląstelės bus gyvybingos kultūrų auginimo pradžioje 60 dienų po išsiuntimo iš mūsų gamyklos. Užtikriname, kad visos medžiagos atitinka analizės sertifikate ir (arba) gaminio lape aprašytas specifikacijas

Išsamią informaciją rasite mūsų <a href=""/Kas mes esame/garantijos/" hreflang=""x-default"">Garantijos pareiškime