A375-GFP

A375-GFP to zmodyfikowana genetycznie odmiana ludzkiej linii komórkowej czerniaka złośliwego A375, stabilnie wyrażająca białko wzmocnionej zielonej fluorescencji (eGFP). Pierwotna linia komórkowa A375 pochodzi z guza czerniaka skóry u dorosłego pacjenta i jest szeroko stosowana jako model czerniaka skórnego, szczególnie w badaniach dotyczących onkogennej sygnalizacji BRAF, ponieważ zawiera mutację BRAF V600E. Mutacja ta prowadzi do konstytutywnej aktywacji szlaku MAPK/ERK, stymulując proliferację i przeżywalność komórek, co sprawia, że komórki A375 są niezwykle przydatne w badaniach nad terapiami celowanymi, takimi jak inhibitory BRAF i MEK. Odmiana wyrażająca GFP zachowuje te cechy molekularne i fenotypowe, umożliwiając jednocześnie zastosowania oparte na fluorescencji.

Stabilne wbudowanie reporterowego eGFP pozwala na wizualizację komórek A375-GFP w czasie rzeczywistym zarówno w systemach in vitro, jak i in vivo. Obrazowanie fluorescencyjne ułatwia monitorowanie proliferacji, migracji, inwazji i zmian morfologicznych komórek, a także śledzenie wzrostu guza i rozprzestrzeniania się przerzutów w modelach ksenotransplantacyjnych. Ulepszony wariant GFP zapewnia większą jasność i stabilność w porównaniu z wcześniejszymi konstruktami GFP, umożliwiając czułe wykrywanie nawet przy małej liczbie komórek. Dzięki temu linia A375-GFP jest szczególnie przydatna w eksperymentach z hodowlą mieszaną, na platformach obrazowania o wysokiej zawartości informacji oraz w badaniach wymagających precyzyjnej rozdzielczości przestrzennej zachowania komórek nowotworowych.

Linia A375-GFP zachowuje agresywny i proliferacyjny fenotyp macierzystej linii czerniaka, w tym wrażliwość na inhibitory szlaku MAPK oraz zdolność do inwazji i tworzenia przerzutów w modelach eksperymentalnych. Dodanie GFP rozszerza jej zastosowanie w przesiewaniu leków, obrazowaniu żywych komórek oraz badaniach interakcji między nowotworem a mikrośrodowiskiem. Podobnie jak w przypadku innych linii komórkowych znakowanych reporterami, w konkretnych zastosowaniach eksperymentalnych zaleca się weryfikację stabilności fluorescencji i jej spójności w kolejnych pasażach.

Modyfikacja genetyczna: Stabilnie zmodyfikowana poprzez transdukcję lentiwirusową bez zdolności do replikacji w celu ekspresji reporterowego białka zielonej fluorescencji ZsGreen1; utrzymywana jako populacja poliklonalna pod selekcją puromycyną (1–5 µg/mL). Poziom bezpieczeństwa S1/BSL-1.

37°C, 5%_CO2, nawilżona atmosfera.

1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

6. Centrifuge the mixture at 200 x g for 5 minutes, carefully discard the supernatant containing freezing medium.

7. Follow the procedure described under Post-Thaw Recovery

W celu długotrwałego przechowywania należy umieścić fiolki w ciekłym azocie w fazie lotnej w temperaturze od -150 do -196 °C. Przechowywanie w temperaturze -80 °C jest dopuszczalne tylko jako krótki etap przejściowy przed przeniesieniem do ciekłego azotu.

Linie komórkowe poddane kriokonserwacji są wysyłane w suchym lodzie w zatwierdzonych, izolowanych opakowaniach z wystarczającą ilością czynnika chłodniczego, aby utrzymać temperaturę około -78°C przez cały czas transportu. Po otrzymaniu przesyłki należy natychmiast sprawdzić pojemnik i bezzwłocznie przenieść fiolki do odpowiedniego miejsca przechowywania.

W Cytion gwarantujemy jakość i żywotność naszych produktów. Gwarantujemy, że nasze komórki będą żywotne na początku hodowli przez 60 dni po wysyłce z naszych zakładów. Zapewniamy, że wszystkie materiały są zgodne ze specyfikacjami opisanymi w certyfikacie analizy i/lub karcie produktu

Szczegółowe informacje można znaleźć w naszej <a href=""/Who-we-are/Warranty/"" hreflang=""x-default"">Oświadczeniu gwarancyjnym