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CERV-186
Tissu
Col de l'utérus
Maladie
Carcinome épidermoïde
Synonymes
Cerv-186, MRI-H-186, MRI-H186

Documents

CERV-186

Cell line · Référence du produit 300290

The CERV-186 cell line, derived in vitro from the xenotransplant of cervical carcinoma MRI-H-186, serves as a biological model for invasive, large-cell, n...

€800.00hors taxes et frais de port
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Lot
Recommandé (lot le plus récent)
1

01Informations générales

Description

La lignée cellulaire CERV-186, dérivée in vitro de la xénogreffe du carcinome cervical MRI-H-186, sert de modèle biologique pour le carcinome épidermoïde invasif à grandes cellules non kératinisantes. Cette lignée cellulaire a été établie et adaptée à la transplantation in vivo sous la direction du Dr Bodgen au Mason Research Institute. Caractérisée par ses propriétés génomiques, MRI-H186 contient environ 26 copies intégrées des formes pleine longueur et tronquée du génome HPV16, qui influencent de manière significative son profil transcriptomique.

Les cellules MRI-H186 se distinguent par leur forte expression de transcrits précoces du HPV16, qu'ils soient de pleine longueur ou tronqués, et présentent notamment des niveaux élevés d'ARN de pleine longueur (fl) E5. Cette signature transcriptionnelle se distingue nettement de celle observée dans d'autres lignées cellulaires de carcinome cervical telles que CaSki et MRI-H196. En outre, l'activité transcriptionnelle de MRI-H186, en termes d'expression de divers autres transcrits, s'aligne étroitement sur les modèles observés dans les lignées cellulaires HPK-IA et C3, ce qui indique un comportement transcriptionnel similaire dans l'ensemble de ces modèles. La présence d'intégrations génomiques du HPV16, qu'elles soient complètes ou tronquées, dans les cellules IRM-H186 est un facteur clé de l'expression vigoureuse des premiers transcrits viraux, particulièrement soulignée par l'expression significative de l'ARN fl E5. Cette activité transcriptionnelle intense culmine au niveau du signal de polyadénylation précoce, soulignant la dynamique transcriptionnelle unique au sein de la lignée cellulaire MRI-H186.

Tissu
Col de l'utérus
Maladie
Carcinome épidermoïde
Synonymes
  • Cerv-186
  • MRI-H-186
  • MRI-H186

02Classification

Organisme
Humain
Sexe
Femme
Propriétés de croissance
Adepte
Niveau de biosécurité
2

03Caractéristiques

Morphologie
De type épithélial
Tumorigène
Oui, sur des souris nues

04Identifiants

Référence
CERV-186 (numéro de catalogue Cytion 300290)
Numéro d'identification fiscale NCBI
9606
Cellosaurus
CVCL_5720

05Expression et sensibilité

Virus
HPV-16 positif
Produits
Cytokératine 8, 18, Vimentine, Desmoplakine

06Manipulation et culture

Milieu de culture
DMEM:Ham's F12 (1:1), w : 3.1 g/L Glucose, w : 2.5 mM L-Glutamine, w : 15 mM HEPES, w : 0.5 mM Sodium pyruvate, w : 1.2 g/L NaHCO3 (numéro d'article Cytion 820400a)
Atmosphère d'incubation

37°C, 5%CO2, atmosphère humidifiée.

Compléments alimentaires
Compléter le milieu avec 10% de FBS
Réactif de dissociation
Accutase
Repiquage
Retirer l'ancien milieu des cellules adhérentes et les laver avec du PBS dépourvu de calcium et de magnésium. Pour les flacons T25, utiliser 3-5 ml de PBS, et pour les flacons T75, 5-10 ml. Ensuite, recouvrir complètement les cellules avec Accutase, en utilisant 1 à 2 ml pour les flacons T25 et 2,5 ml pour les flacons T75. Laisser les cellules incuber à température ambiante pendant 8-10 minutes pour les détacher. Après incubation, mélanger délicatement les cellules avec 10 ml de milieu pour les remettre en suspension, puis centrifuger à 300xg pendant 3 minutes. Jeter le surnageant, remettre les cellules en suspension dans du milieu frais et les transférer dans de nouveaux flacons contenant déjà du milieu frais.
Densité de semis
2 x 104 cellules/cm2 donneront lieu à une monocouche confluente dans les 7 jours.
Renouvellement des fluides
2 à 3 fois par semaine
Récupération après le dégel
Après décongélation, ensemencer les cellules à raison de 5 x 104 cellules/cm2 et laisser les cellules se remettre du processus de congélation et adhérer pendant au moins 24 heures.
Décongélation et mise en culture
  1. Confirm that the vial remains deeply frozen upon delivery, as cells are shipped on dry ice to maintain optimal temperatures during transit.

  2. Upon receipt, either store the cryovial immediately at temperatures below -150°C to ensure the preservation of cellular integrity, or proceed to step 3 if immediate culturing is required.

  3. For immediate culturing, swiftly thaw the vial by immersing it in a 37°C water bath with clean water and an antimicrobial agent, agitating gently for 40-60 seconds until a small ice clump remains.

  4. Perform all subsequent steps under sterile conditions in a flow hood, disinfecting the cryovial with 70% ethanol before opening.

  5. Carefully open the disinfected vial and transfer the cell suspension into a 15 ml centrifuge tube containing 8 ml of room-temperature culture medium, mixing gently.

  6. Centrifuge the mixture at 300 x g for 3 minutes to separate the cells and carefully discard the supernatant containing residual freezing medium.

  7. Gently resuspend the cell pellet in 10 ml of fresh culture medium. For adherent cells, divide the suspension between two T25 culture flasks; for suspension cultures, transfer all the medium into one T25 flask to promote effective cell interaction and growth.

  8. Adhere to established subculture protocols for continued growth and maintenance of the cell line, ensuring reliable experimental outcomes.

07Contrôle qualité et cryoconservation

Stérilité

La contamination par les mycoplasmes est exclue à l'aide de tests basés sur la PCR et de méthodes de détection des mycoplasmes basées sur la luminescence.

Pour s'assurer de l'absence de contamination bactérienne, fongique ou levurienne, les cultures cellulaires font l'objet d'inspections visuelles quotidiennes.

Milieu de congélation
Comme milieu de cryoconservation, nous utilisons un milieu de croissance complet (comprenant du FBS) + 10 % de DMSO pour une viabilité adéquate après décongélation, ou CM-1 (numéro de catalogue 800100 de Cytion), qui comprend des osmoprotectants et des stabilisateurs métaboliques optimisés pour améliorer la récupération et réduire le stress induit par la cryogénisation.
Conditions de stockage

Pour une conservation à long terme, placer les flacons dans de l'azote liquide en phase vapeur à une température comprise entre -150 et -196 °C environ. Le stockage à -80 °C n'est acceptable qu'en tant qu'étape intermédiaire de courte durée avant le transfert dans l'azote liquide.

Conditions de livraison

Les lignées cellulaires cryoconservées sont expédiées sur glace sèche dans des emballages isolés et validés, avec suffisamment de réfrigérant pour maintenir une température d'environ -78 °C tout au long du transport. À la réception, inspecter immédiatement le conteneur et transférer sans délai les flacons dans un lieu de stockage approprié.

08Donateur

Âge du donneur
42 ans
Origine ethnique
Africains